上海交通大学学报（医学版）
上海交通大學學報（醫學版）
상해교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)
2007年
8期
972-976
,共5页
李圣贤%马勤耘%刘智%李雪松%宋怀东
李聖賢%馬勤耘%劉智%李雪鬆%宋懷東
리골현%마근운%류지%리설송%송부동
子宫球蛋白相关蛋白1%GST融合蛋白%多克隆抗体%亚细胞定位
子宮毬蛋白相關蛋白1%GST融閤蛋白%多剋隆抗體%亞細胞定位
자궁구단백상관단백1%GST융합단백%다극륭항체%아세포정위
目的 子宫球蛋白相关蛋白1(UGRP1)是一种功能未知的分泌蛋白.通过表达、纯化蛋白、制备抗体及其在组织中表达的研究,为进一步研究其功能奠定基础.方法 从人胎肺组织中克隆得到UGRP1基因,构建重组表达质粒pGEX-5X-1/UGRP1.将此质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,表达含谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的GST-UGRP1融合蛋白.此融合蛋白经纯化分离后,免疫新西兰大白兔,制备其多克隆抗体.用Western 印迹的方法检测多抗血清.通过构建含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的EGFP-N2-UGRP1载体,转染非洲绿猴肾细胞(COS细胞)表达重组蛋白,对UGRP1的表达进行亚细胞定位.结果 成功构建了pGEX-5X-1/UGRP1载体,获得了高纯度的重组蛋白和多克隆抗体.免疫组化分析表明UGRP1表达于肺支气管上皮细胞,亚细胞定位分析证实UGRP1主要表达于细胞浆.结论 研究发现UGRP1表达于肺支气管上皮细胞和在COS细胞的胞浆中表达.经纯化获得蛋白并制备抗体,为进一步研究UGRP1的功能奠定了基础.
目的 子宮毬蛋白相關蛋白1(UGRP1)是一種功能未知的分泌蛋白.通過錶達、純化蛋白、製備抗體及其在組織中錶達的研究,為進一步研究其功能奠定基礎.方法 從人胎肺組織中剋隆得到UGRP1基因,構建重組錶達質粒pGEX-5X-1/UGRP1.將此質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3)後用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導,錶達含穀胱甘肽-S-轉移酶(GST)的GST-UGRP1融閤蛋白.此融閤蛋白經純化分離後,免疫新西蘭大白兔,製備其多剋隆抗體.用Western 印跡的方法檢測多抗血清.通過構建含增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)的EGFP-N2-UGRP1載體,轉染非洲綠猴腎細胞(COS細胞)錶達重組蛋白,對UGRP1的錶達進行亞細胞定位.結果 成功構建瞭pGEX-5X-1/UGRP1載體,穫得瞭高純度的重組蛋白和多剋隆抗體.免疫組化分析錶明UGRP1錶達于肺支氣管上皮細胞,亞細胞定位分析證實UGRP1主要錶達于細胞漿.結論 研究髮現UGRP1錶達于肺支氣管上皮細胞和在COS細胞的胞漿中錶達.經純化穫得蛋白併製備抗體,為進一步研究UGRP1的功能奠定瞭基礎.
목적 자궁구단백상관단백1(UGRP1)시일충공능미지적분비단백.통과표체、순화단백、제비항체급기재조직중표체적연구,위진일보연구기공능전정기출.방법 종인태폐조직중극륭득도UGRP1기인,구건중조표체질립pGEX-5X-1/UGRP1.장차질립전화대장간균BL21(DE3)후용이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도,표체함곡광감태-S-전이매(GST)적GST-UGRP1융합단백.차융합단백경순화분리후,면역신서란대백토,제비기다극륭항체.용Western 인적적방법검측다항혈청.통과구건함증강형록색형광단백(EGFP)적EGFP-N2-UGRP1재체,전염비주록후신세포(COS세포)표체중조단백,대UGRP1적표체진행아세포정위.결과 성공구건료pGEX-5X-1/UGRP1재체,획득료고순도적중조단백화다극륭항체.면역조화분석표명UGRP1표체우폐지기관상피세포,아세포정위분석증실UGRP1주요표체우세포장.결론 연구발현UGRP1표체우폐지기관상피세포화재COS세포적포장중표체.경순화획득단백병제비항체,위진일보연구UGRP1적공능전정료기출.
