CAJ | 학술논문

目的:评价微粒体Ⅱ相代谢酶基因在小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)定向分化肝细胞中的表达,为进一步探索酶蛋白表达及其催化活性提供依据.方法:ES细胞体外悬滴培养定向分化成肝细胞表型,RT-PCR法检测肝细胞发育依赖性基因AFP、ALB、CYP7a1的表达,免疫细胞化学法确认成熟肝细胞特异性标记物白蛋白(ALB)表达,RT-PCR法检测上述肝细胞中Ⅱ相代谢酶尿苷二磷酸葡萄糖醛酸结合酶系(UGTs)和微粒体谷胱甘肽S-转移酶1(mGST1)基因表达.结果:ES细胞在定向分化至d 8时,肝细胞发育依赖性基因AFP和ALB有较高表达,d 18时AFP表达甚微而ALB表达显著增加,并伴有成熟肝细胞特异性基因CYP7a1的表达.定向分化呈肝细胞表型时,成熟肝细胞特异性蛋白ALB呈强阳性表达.分化过程中Ⅱ相代谢酶基因UGT1a1、UGT1a9在分化前后均稳定表达;UGT1a6表达呈发育依赖性;UGT2b5未见表达;mGST1在分化前后均有少量表达,但在成熟肝细胞中表达显著增加,与成熟小鼠肝相似.结论:ES细胞体外悬滴培养可定向分化为成熟肝细胞;Ⅱ相代谢酶UGTs、mGST1基因在分化成熟肝细胞表达与小鼠肝细胞相似,可望为Ⅱ相代谢酶代谢深层次研究提供高效模型.
목적:평개미립체Ⅱ상대사매기인재소서배태간세포(embryonic stem cells,ES세포)정향분화간세포중적표체,위진일보탐색매단백표체급기최화활성제공의거.방법:ES세포체외현적배양정향분화성간세포표형,RT-PCR법검측간세포발육의뢰성기인AFP、ALB、CYP7a1적표체,면역세포화학법학인성숙간세포특이성표기물백단백(ALB)표체,RT-PCR법검측상술간세포중Ⅱ상대사매뇨감이린산포도당철산결합매계(UGTs)화미립체곡광감태S-전이매1(mGST1)기인표체.결과:ES세포재정향분화지d 8시,간세포발육의뢰성기인AFP화ALB유교고표체,d 18시AFP표체심미이ALB표체현저증가,병반유성숙간세포특이성기인CYP7a1적표체.정향분화정간세포표형시,성숙간세포특이성단백ALB정강양성표체.분화과정중Ⅱ상대사매기인UGT1a1、UGT1a9재분화전후균은정표체;UGT1a6표체정발육의뢰성;UGT2b5미견표체;mGST1재분화전후균유소량표체,단재성숙간세포중표체현저증가,여성숙소서간상사.결론:ES세포체외현적배양가정향분화위성숙간세포;Ⅱ상대사매UGTs、mGST1기인재분화성숙간세포표체여소서간세포상사,가망위Ⅱ상대사매대사심층차연구제공고효모형.