中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2008年
8期
909-913
,共5页
周前进%庞林海%张红丽%杜爱芳
週前進%龐林海%張紅麗%杜愛芳
주전진%방림해%장홍려%두애방
秀丽隐杆线虫%启动子%电穿孔法%表达%功能
秀麗隱桿線蟲%啟動子%電穿孔法%錶達%功能
수려은간선충%계동자%전천공법%표체%공능
为探讨增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在秀丽隐杆线虫体内的异源表达,以及电穿孔技术在线虫基因转化中应用的可能性,根据秀丽隐杆线虫Act-1基因序列设计引物,以其基因组DNA为模板,进行PCR扩增,成功扩增出Act-1启动子.将PCR产物与pUCm-T载体连接后,转化至DH5α感受态细胞,筛选出阳性克隆并测序.pEG-FP-N1真核表达载体经双酶切去掉CMV启动子序列,补平自连成载体pEGFP-4.1(4.1kb).pEGFP-4.1和T栽体上的Act-1启动子序列分别经双酶切,连接筛选阳性克隆,并进行酶切鉴定构成pAct-EGFP绿色荧光蛋白表达载体.通过电穿孔法转化秀丽隐杆线虫,通过PCR检测及激光共聚焦显微镜观察发现绿色荧光基因在虫体有明显的表达.
為探討增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)基因在秀麗隱桿線蟲體內的異源錶達,以及電穿孔技術在線蟲基因轉化中應用的可能性,根據秀麗隱桿線蟲Act-1基因序列設計引物,以其基因組DNA為模闆,進行PCR擴增,成功擴增齣Act-1啟動子.將PCR產物與pUCm-T載體連接後,轉化至DH5α感受態細胞,篩選齣暘性剋隆併測序.pEG-FP-N1真覈錶達載體經雙酶切去掉CMV啟動子序列,補平自連成載體pEGFP-4.1(4.1kb).pEGFP-4.1和T栽體上的Act-1啟動子序列分彆經雙酶切,連接篩選暘性剋隆,併進行酶切鑒定構成pAct-EGFP綠色熒光蛋白錶達載體.通過電穿孔法轉化秀麗隱桿線蟲,通過PCR檢測及激光共聚焦顯微鏡觀察髮現綠色熒光基因在蟲體有明顯的錶達.
위탐토증강형록색형광단백(EGFP)기인재수려은간선충체내적이원표체,이급전천공기술재선충기인전화중응용적가능성,근거수려은간선충Act-1기인서렬설계인물,이기기인조DNA위모판,진행PCR확증,성공확증출Act-1계동자.장PCR산물여pUCm-T재체련접후,전화지DH5α감수태세포,사선출양성극륭병측서.pEG-FP-N1진핵표체재체경쌍매절거도CMV계동자서렬,보평자련성재체pEGFP-4.1(4.1kb).pEGFP-4.1화T재체상적Act-1계동자서렬분별경쌍매절,련접사선양성극륭,병진행매절감정구성pAct-EGFP록색형광단백표체재체.통과전천공법전화수려은간선충,통과PCR검측급격광공취초현미경관찰발현록색형광기인재충체유명현적표체.
