遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2006年
4期
463-469
,共7页
胡延春%张乃生%邓俊良%左之才%廖玉辉%欧阳红生
鬍延春%張迺生%鄧俊良%左之纔%廖玉輝%歐暘紅生
호연춘%장내생%산준량%좌지재%료옥휘%구양홍생
α-银环蛇毒素%基因克隆%非融合原核表达%免疫原性%生物学活性
α-銀環蛇毒素%基因剋隆%非融閤原覈錶達%免疫原性%生物學活性
α-은배사독소%기인극륭%비융합원핵표체%면역원성%생물학활성
根据文献报道α-银环蛇毒素的氨基酸序列推导出其DNA序列,设计并人工合成两两互补的14条寡核苷酸片段.经片段延伸、PCR、克隆,成功构建α-银环蛇毒素基因克隆质粒;质粒经Xba Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切回收后连接于表达载体pET28a(+)中,分别转化BL21(DE3)、BL21(DE3)Codon plus、BL21(DE3)plysS进行诱导表达,表达产物经Tris/tricine系统进行SDS-PAGE分析.结果表明:该基因已在大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中进行了非融合表达,其表达量占细菌总蛋白的11.98%,主要以包涵体形式存在;同时对表达条件进行了优化,其表达量可达16.28%.经Western blot分析,在大约8 kDa处出现明显的目的带,与预计蛋白分子量大小一致,说明表达产物与天然α-银环蛇毒素具有相似的免疫原性.表达产物纯化、复性后经动物毒性试验表明:表达的α-银环蛇毒素蛋白具有生物学活性,小鼠腹腔注射其LD50约为1.28 μg/g.
根據文獻報道α-銀環蛇毒素的氨基痠序列推導齣其DNA序列,設計併人工閤成兩兩互補的14條寡覈苷痠片段.經片段延伸、PCR、剋隆,成功構建α-銀環蛇毒素基因剋隆質粒;質粒經Xba Ⅰ和EcoR Ⅰ雙酶切迴收後連接于錶達載體pET28a(+)中,分彆轉化BL21(DE3)、BL21(DE3)Codon plus、BL21(DE3)plysS進行誘導錶達,錶達產物經Tris/tricine繫統進行SDS-PAGE分析.結果錶明:該基因已在大腸桿菌BL21(DE3)宿主菌中進行瞭非融閤錶達,其錶達量佔細菌總蛋白的11.98%,主要以包涵體形式存在;同時對錶達條件進行瞭優化,其錶達量可達16.28%.經Western blot分析,在大約8 kDa處齣現明顯的目的帶,與預計蛋白分子量大小一緻,說明錶達產物與天然α-銀環蛇毒素具有相似的免疫原性.錶達產物純化、複性後經動物毒性試驗錶明:錶達的α-銀環蛇毒素蛋白具有生物學活性,小鼠腹腔註射其LD50約為1.28 μg/g.
근거문헌보도α-은배사독소적안기산서렬추도출기DNA서렬,설계병인공합성량량호보적14조과핵감산편단.경편단연신、PCR、극륭,성공구건α-은배사독소기인극륭질립;질립경Xba Ⅰ화EcoR Ⅰ쌍매절회수후련접우표체재체pET28a(+)중,분별전화BL21(DE3)、BL21(DE3)Codon plus、BL21(DE3)plysS진행유도표체,표체산물경Tris/tricine계통진행SDS-PAGE분석.결과표명:해기인이재대장간균BL21(DE3)숙주균중진행료비융합표체,기표체량점세균총단백적11.98%,주요이포함체형식존재;동시대표체조건진행료우화,기표체량가체16.28%.경Western blot분석,재대약8 kDa처출현명현적목적대,여예계단백분자량대소일치,설명표체산물여천연α-은배사독소구유상사적면역원성.표체산물순화、복성후경동물독성시험표명:표체적α-은배사독소단백구유생물학활성,소서복강주사기LD50약위1.28 μg/g.
