CAJ | 학술논문

目的建立苯并芘诱导的具有转化细胞部分特征的人胚肺成纤维细胞(T-HELF)模型,并观察T-HELF细胞中cyclin D1、CDK4和E2F-1/4蛋白表达的改变.方法以200、100、50、25、5、1μmol/L的苯并芘处理人胚肺成纤维细胞(HELF)24小时,用噻唑蓝(MTT)比色法测定苯并芘的细胞毒性.根据MTT结果确定以100和200μmol/L苯并芘给HELF细胞染毒3次,染毒结束后培养6周观察细胞的形态变化,培养12周后观察其形态变化及软琼脂中细胞克隆的生长.用流式细胞仪检测T-HELF细胞周期的变化,用Western blot检测T-HELF细胞中cyclin D1、CDK4和E2F-1/4蛋白表达的改变.结果MTT结果显示苯并芘浓度在25～200μmol/L之间时,细胞存活率为78%～80%.苯并芘200μmol/L组染毒4周后细胞死亡.100μmol/L组染毒结束后培养6周,观察到细胞变大,核增大或多核;12周后,在软琼脂中可以生长为细胞克隆,说明HELF细胞具有了转化细胞的部分特征.T-HELF细胞在无血清培养时,细胞周期没有停滞.用Western blot检测发现和正常HELF细胞相比T-HELF细胞的cyclin D1表达明显增加,CDK4、E2F-1和E2F-4的表达没有明显变化.结论建立了苯并芘诱导的具有转化细胞部分特征的人胚肺成纤维细胞模型,可用于苯并芘致癌的分子机制研究.无血清培养时,T-HELF细胞周期没有停滞,和正常HELF细胞相比T-HELF细胞cyclin D1表达明显增加,cyclin D1可能与T-HELF细胞的快速增殖有关.
목적건립분병비유도적구유전화세포부분특정적인배폐성섬유세포(T-HELF)모형,병관찰T-HELF세포중cyclin D1、CDK4화E2F-1/4단백표체적개변.방법이200、100、50、25、5、1μmol/L적분병비처리인배폐성섬유세포(HELF)24소시,용새서람(MTT)비색법측정분병비적세포독성.근거MTT결과학정이100화200μmol/L분병비급HELF세포염독3차,염독결속후배양6주관찰세포적형태변화,배양12주후관찰기형태변화급연경지중세포극륭적생장.용류식세포의검측T-HELF세포주기적변화,용Western blot검측T-HELF세포중cyclin D1、CDK4화E2F-1/4단백표체적개변.결과MTT결과현시분병비농도재25～200μmol/L지간시,세포존활솔위78%～80%.분병비200μmol/L조염독4주후세포사망.100μmol/L조염독결속후배양6주,관찰도세포변대,핵증대혹다핵;12주후,재연경지중가이생장위세포극륭,설명HELF세포구유료전화세포적부분특정.T-HELF세포재무혈청배양시,세포주기몰유정체.용Western blot검측발현화정상HELF세포상비T-HELF세포적cyclin D1표체명현증가,CDK4、E2F-1화E2F-4적표체몰유명현변화.결론건립료분병비유도적구유전화세포부분특정적인배폐성섬유세포모형,가용우분병비치암적분자궤제연구.무혈청배양시,T-HELF세포주기몰유정체,화정상HELF세포상비T-HELF세포cyclin D1표체명현증가,cyclin D1가능여T-HELF세포적쾌속증식유관.