CAJ | 학술논문

应用PCR技术从含有丙型肝炎病毒(HCV)全长开放阅读框的质粒pBRTM/HCV 1～3 011中获得NS5A全长基因片段,利用基因重组技术将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-)中.通过酶切、PCR及测序鉴定证实,NS5A基因已正确插入到pcDNA3.1(-)中.再利用脂质体介导转染Huh7细胞,30h后收获细胞,经Western blot验证,证实HCV的NS5A基因在Huh7细胞中已经获得表达.在培养条件完全一致的条件下,表达NS5A基因的Huh7细胞与pcDNA3.1(-)转染的细胞在转染30h后被收集起来,乙醇固定,PI染色后利用流式细胞仪检测细胞周期变化.G0/G1期由60.6%下降到49.7%,S期由23.9%上升到32.7%,而转染pcDNA3.1(-)细胞的细胞周期与正常的Huh7细胞则差别不大.从而证明HCV NS5A蛋白对Huh7细胞周期具有调节作用.
응용PCR기술종함유병형간염병독(HCV)전장개방열독광적질립pBRTM/HCV 1～3 011중획득NS5A전장기인편단,이용기인중조기술장기극륭지진핵표체재체pcDNA3.1(-)중.통과매절、PCR급측서감정증실,NS5A기인이정학삽입도pcDNA3.1(-)중.재이용지질체개도전염Huh7세포,30h후수획세포,경Western blot험증,증실HCV적NS5A기인재Huh7세포중이경획득표체.재배양조건완전일치적조건하,표체NS5A기인적Huh7세포여pcDNA3.1(-)전염적세포재전염30h후피수집기래,을순고정,PI염색후이용류식세포의검측세포주기변화.G0/G1기유60.6%하강도49.7%,S기유23.9%상승도32.7%,이전염pcDNA3.1(-)세포적세포주기여정상적Huh7세포칙차별불대.종이증명HCV NS5A단백대Huh7세포주기구유조절작용.