CAJ | 학술논문

目的:将带信号肽的人表皮生长因子基因转染原代成人角质形成细胞, 证实细胞活性及hEGF的有效表达, 为后期的皮肤修复研究打下基础.方法:先酶切验证pcDNA3.1-hEGF, 后消化成人皮肤组织, 以Defined Keratinocyte-SFM(DKSFM)传代培养角质形成细胞并鉴定, 脂质体转染质粒pcDNA3.1-hEGF入细胞, 转基因细胞培养48 h后作RT-PCR和Western-blot分析, 上清分别进行放射免疫测定和MTT测定.结果:质粒pcDNA3.1-hEGF上的hEGF序列经测序证实,双酶切后获得约230 bp和5.4 kb条带;成人角质形成细胞体外培养可快速稳定增殖, 转hEGF基因细胞经RT-PCR扩增出一条约230 bp的特异性条带, Western-blot检测到hEGF表达明显升高;放射免疫法和MTT实验证实转基因细胞有稳定的hEGF蛋白分泌.结论:质粒pcDNA3.1-hEGF在脂质体介导下成功转染成人皮肤角质形成细胞, 转基因细胞能分泌有生物活性的EGF;体外培养的成人皮肤角质形成细胞可见少量EGF分泌.
목적:장대신호태적인표피생장인자기인전염원대성인각질형성세포, 증실세포활성급hEGF적유효표체, 위후기적피부수복연구타하기출.방법:선매절험증pcDNA3.1-hEGF, 후소화성인피부조직, 이Defined Keratinocyte-SFM(DKSFM)전대배양각질형성세포병감정, 지질체전염질립pcDNA3.1-hEGF입세포, 전기인세포배양48 h후작RT-PCR화Western-blot분석, 상청분별진행방사면역측정화MTT측정.결과:질립pcDNA3.1-hEGF상적hEGF서렬경측서증실,쌍매절후획득약230 bp화5.4 kb조대;성인각질형성세포체외배양가쾌속은정증식, 전hEGF기인세포경RT-PCR확증출일조약230 bp적특이성조대, Western-blot검측도hEGF표체명현승고;방사면역법화MTT실험증실전기인세포유은정적hEGF단백분비.결론:질립pcDNA3.1-hEGF재지질체개도하성공전염성인피부각질형성세포, 전기인세포능분비유생물활성적EGF;체외배양적성인피부각질형성세포가견소량EGF분비.