细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2009年
5期
417-419
,共3页
鲁俊鹏%田新贵%罗满林%李海涛%周志超%周荣
魯俊鵬%田新貴%囉滿林%李海濤%週誌超%週榮
로준붕%전신귀%라만림%리해도%주지초%주영
B型流感病毒%HA基因%重组腺病毒
B型流感病毒%HA基因%重組腺病毒
B형류감병독%HA기인%중조선병독
目的:构建包含有B型流感病毒B/Guangzhou/01/2007株血凝素(HA)基因的重组3型腺病毒.方法:用PCR方法扩增得到HA基因, 酶切后克隆至3型腺病毒穿梭质粒pSK-CMV, 构建重组穿梭质粒pSK-CMV-HA, 然后在大肠杆菌BJ5183内进行经 Not I和 Eco R V线性化的pSK-CMV-HA和经 Rsr Ⅱ线性化的骨架质粒pBRAdV3△E3的同源重组, AsiS I酶切线性化重组腺病毒质粒pBRAdV3△E3-HA后脂质体法转染HEp-2细胞, 进行病毒包装和增殖后得到重组腺病毒rAdV3△E3-HA, 并且通过病变观察、扫描电镜、 RT-PCR、免疫细胞化学方法对基因组的包装和HA基因的表达进行检测.结果:将HA基因克隆入pSK-CMV获得重组穿梭质粒pSK-CMV-HA, 线性化的pSK-CMV-HA与pBRAdV3△E3同源重组后获得pBRAdV3△E3-HA, 线性化的pBRAdV3△E3-HA转染HEp-2细胞观察到细胞病变和HA基因的表达.结论:成功构建了带有HA基因的重组腺病毒rAdV3△E3-HA, 为B型流感病毒-3型腺病毒二联活苗的研究提供了依据.
目的:構建包含有B型流感病毒B/Guangzhou/01/2007株血凝素(HA)基因的重組3型腺病毒.方法:用PCR方法擴增得到HA基因, 酶切後剋隆至3型腺病毒穿梭質粒pSK-CMV, 構建重組穿梭質粒pSK-CMV-HA, 然後在大腸桿菌BJ5183內進行經 Not I和 Eco R V線性化的pSK-CMV-HA和經 Rsr Ⅱ線性化的骨架質粒pBRAdV3△E3的同源重組, AsiS I酶切線性化重組腺病毒質粒pBRAdV3△E3-HA後脂質體法轉染HEp-2細胞, 進行病毒包裝和增殖後得到重組腺病毒rAdV3△E3-HA, 併且通過病變觀察、掃描電鏡、 RT-PCR、免疫細胞化學方法對基因組的包裝和HA基因的錶達進行檢測.結果:將HA基因剋隆入pSK-CMV穫得重組穿梭質粒pSK-CMV-HA, 線性化的pSK-CMV-HA與pBRAdV3△E3同源重組後穫得pBRAdV3△E3-HA, 線性化的pBRAdV3△E3-HA轉染HEp-2細胞觀察到細胞病變和HA基因的錶達.結論:成功構建瞭帶有HA基因的重組腺病毒rAdV3△E3-HA, 為B型流感病毒-3型腺病毒二聯活苗的研究提供瞭依據.
목적:구건포함유B형류감병독B/Guangzhou/01/2007주혈응소(HA)기인적중조3형선병독.방법:용PCR방법확증득도HA기인, 매절후극륭지3형선병독천사질립pSK-CMV, 구건중조천사질립pSK-CMV-HA, 연후재대장간균BJ5183내진행경 Not I화 Eco R V선성화적pSK-CMV-HA화경 Rsr Ⅱ선성화적골가질립pBRAdV3△E3적동원중조, AsiS I매절선성화중조선병독질립pBRAdV3△E3-HA후지질체법전염HEp-2세포, 진행병독포장화증식후득도중조선병독rAdV3△E3-HA, 병차통과병변관찰、소묘전경、 RT-PCR、면역세포화학방법대기인조적포장화HA기인적표체진행검측.결과:장HA기인극륭입pSK-CMV획득중조천사질립pSK-CMV-HA, 선성화적pSK-CMV-HA여pBRAdV3△E3동원중조후획득pBRAdV3△E3-HA, 선성화적pBRAdV3△E3-HA전염HEp-2세포관찰도세포병변화HA기인적표체.결론:성공구건료대유HA기인적중조선병독rAdV3△E3-HA, 위B형류감병독-3형선병독이련활묘적연구제공료의거.
