中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2009年
4期
494-501
,共8页
赵晶%董雅娟%柏学进%靳亚平%张廷龙%封纪武
趙晶%董雅娟%柏學進%靳亞平%張廷龍%封紀武
조정%동아연%백학진%근아평%장정룡%봉기무
昆明白小鼠%胎儿成纤维细胞%饲养层%胚胎干细胞
昆明白小鼠%胎兒成纖維細胞%飼養層%胚胎榦細胞
곤명백소서%태인성섬유세포%사양층%배태간세포
建立有效的昆明白小鼠胎儿成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast,MEF)饲养层培养体系,用于分离和培养小鼠胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ES细胞)的研究.(1)取怀孕14.5 d昆明白小鼠胎儿分离成纤维细胞,利用体外培养体系分离传代,选取生长旺盛并且已纯化的P3代的MEF,经丝裂霉素处理后.用细胞计数板计算活细胞数,分别按1×104、1×106、1×108/mL密度接种,制备饲养层,观察不同密度饲养层的生长状况.(2)取怀孕4 d的昆明白小鼠囊胚,接种在不同密度饲养层上.观察不同密度饲养层上囊胚、ICM及ES细胞的克隆生长情况.结果显示:囊胚在密度为1 × 106/mL的饲养层上,贴壁率和ICM孵出率分别为(97.0±3.606)%和(96.3±2.887)%,显著高于其他2组;密度为1×104/mL饲养层上的ES细胞克隆形成率高于密度为1×104/mL(差异极显著,P<0.01)和1×108/mL饲养层上的ES细胞克隆形成率(差异显著,P<0.05);而1×104/mL饲养层和1×108/mL饲养层上的ES细胞克隆形成率差异不显著(P>0.05).结果表明:以1×104/mL密度接种的MEF作为饲养层,最适合用于分离培养昆明白小鼠ES细胞,有利于囊胚的发育,ICM的增殖,促进ES细胞的增殖,并起到抑制其分化的作用.
建立有效的昆明白小鼠胎兒成纖維細胞(Mouse embryonic fibroblast,MEF)飼養層培養體繫,用于分離和培養小鼠胚胎榦細胞(Embryonic stem cell,ES細胞)的研究.(1)取懷孕14.5 d昆明白小鼠胎兒分離成纖維細胞,利用體外培養體繫分離傳代,選取生長旺盛併且已純化的P3代的MEF,經絲裂黴素處理後.用細胞計數闆計算活細胞數,分彆按1×104、1×106、1×108/mL密度接種,製備飼養層,觀察不同密度飼養層的生長狀況.(2)取懷孕4 d的昆明白小鼠囊胚,接種在不同密度飼養層上.觀察不同密度飼養層上囊胚、ICM及ES細胞的剋隆生長情況.結果顯示:囊胚在密度為1 × 106/mL的飼養層上,貼壁率和ICM孵齣率分彆為(97.0±3.606)%和(96.3±2.887)%,顯著高于其他2組;密度為1×104/mL飼養層上的ES細胞剋隆形成率高于密度為1×104/mL(差異極顯著,P<0.01)和1×108/mL飼養層上的ES細胞剋隆形成率(差異顯著,P<0.05);而1×104/mL飼養層和1×108/mL飼養層上的ES細胞剋隆形成率差異不顯著(P>0.05).結果錶明:以1×104/mL密度接種的MEF作為飼養層,最適閤用于分離培養昆明白小鼠ES細胞,有利于囊胚的髮育,ICM的增殖,促進ES細胞的增殖,併起到抑製其分化的作用.
건립유효적곤명백소서태인성섬유세포(Mouse embryonic fibroblast,MEF)사양층배양체계,용우분리화배양소서배태간세포(Embryonic stem cell,ES세포)적연구.(1)취부잉14.5 d곤명백소서태인분리성섬유세포,이용체외배양체계분리전대,선취생장왕성병차이순화적P3대적MEF,경사렬매소처리후.용세포계수판계산활세포수,분별안1×104、1×106、1×108/mL밀도접충,제비사양층,관찰불동밀도사양층적생장상황.(2)취부잉4 d적곤명백소서낭배,접충재불동밀도사양층상.관찰불동밀도사양층상낭배、ICM급ES세포적극륭생장정황.결과현시:낭배재밀도위1 × 106/mL적사양층상,첩벽솔화ICM부출솔분별위(97.0±3.606)%화(96.3±2.887)%,현저고우기타2조;밀도위1×104/mL사양층상적ES세포극륭형성솔고우밀도위1×104/mL(차이겁현저,P<0.01)화1×108/mL사양층상적ES세포극륭형성솔(차이현저,P<0.05);이1×104/mL사양층화1×108/mL사양층상적ES세포극륭형성솔차이불현저(P>0.05).결과표명:이1×104/mL밀도접충적MEF작위사양층,최괄합용우분리배양곤명백소서ES세포,유리우낭배적발육,ICM적증식,촉진ES세포적증식,병기도억제기분화적작용.
