复旦学报(自然科学版)
複旦學報(自然科學版)
복단학보(자연과학판)
JOURNAL OF FUDAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2004年
2期
181-184,189
,共5页
张淼%赵志安%杨婷婷%刘林%宋大新
張淼%趙誌安%楊婷婷%劉林%宋大新
장묘%조지안%양정정%류림%송대신
人载脂蛋白ApoAⅠ%分泌型载体%毕赤氏酵母%蛋白质印迹%N末端氨基酸顺序测定
人載脂蛋白ApoAⅠ%分泌型載體%畢赤氏酵母%蛋白質印跡%N末耑氨基痠順序測定
인재지단백ApoAⅠ%분비형재체%필적씨효모%단백질인적%N말단안기산순서측정
将化学法合成的apoAⅠ基因插入分泌型载体pPIC9K .将重组的pPIC9K-apoAⅠ用BglⅡ酶切后,转化Pichia pastoris GS115 菌株,筛选获得G418高抗性转化子. 转化子经摇瓶发酵和甲醇诱导,上清液用SDS-PAGE检测,有明显的rApoAⅠ表达. 经Phenyl-sepharose 6(Fast Flow)疏水层析柱和Sephadex G-50(coarse)分子筛层析,得到rApoAⅠ蛋白纯品. 经Western blotting,N末端氨基酸顺序测定证明,毕赤氏酵母表达的rApoAⅠ与人血浆提取的ApoAⅠ基本一致.
將化學法閤成的apoAⅠ基因插入分泌型載體pPIC9K .將重組的pPIC9K-apoAⅠ用BglⅡ酶切後,轉化Pichia pastoris GS115 菌株,篩選穫得G418高抗性轉化子. 轉化子經搖瓶髮酵和甲醇誘導,上清液用SDS-PAGE檢測,有明顯的rApoAⅠ錶達. 經Phenyl-sepharose 6(Fast Flow)疏水層析柱和Sephadex G-50(coarse)分子篩層析,得到rApoAⅠ蛋白純品. 經Western blotting,N末耑氨基痠順序測定證明,畢赤氏酵母錶達的rApoAⅠ與人血漿提取的ApoAⅠ基本一緻.
장화학법합성적apoAⅠ기인삽입분비형재체pPIC9K .장중조적pPIC9K-apoAⅠ용BglⅡ매절후,전화Pichia pastoris GS115 균주,사선획득G418고항성전화자. 전화자경요병발효화갑순유도,상청액용SDS-PAGE검측,유명현적rApoAⅠ표체. 경Phenyl-sepharose 6(Fast Flow)소수층석주화Sephadex G-50(coarse)분자사층석,득도rApoAⅠ단백순품. 경Western blotting,N말단안기산순서측정증명,필적씨효모표체적rApoAⅠ여인혈장제취적ApoAⅠ기본일치.
