CAJ | 학술논문

目的构建含乙型肝炎表面抗原(HBsAg)基因的重组腺相关病毒(rAAV)并观察目的基因的表达和功能.方法采用PCR法从PTHBV-1质粒中扩增HBsAg基因(ayw亚型);将PCR扩增产物插入腺相关病毒(AAV)表达质粒pSNAV中,构建重组质粒pSNAV-HBsAg;用脂质体转染的方法将重组质粒转入BHK-21细胞中,G418筛选得到转入重组质粒并能表达目的基因的细胞系BHK-HBsAg;用具有rAAV包装功能的HSV-1-HSV1-rc/△UL2感染BHK-HBsAg,纯化后得到rAAV-HBsAg;ELISA检测重组病毒表面抗原基因在BHK-21细胞和293细胞中的表达;用rAAV-HBsAg免疫BalB/C小鼠,RIA法检测血清中表面抗体的滴度.结果ELISA法检测到混合细胞系BHK-HBsAg中HBsAg的表达量为(28.6±6.7)ng/5×106细胞;rAAV-HBsAg感染BHK-21细胞和293细胞后均能检测到HBsAg的表达,表达量随感染复数的增加而升高;rAAV-HBsAg免疫的BalB/C小鼠能产生表面抗体(抗-HBs抗体).结论rAAV-HBsAg在体外能表达,免疫动物能诱导体液免疫反应的产生.rAAV-HBsAg有希望成为乙型肝炎候选疫苗,也可以进一步用于探索慢性乙型肝炎的免疫治疗.
목적구건함을형간염표면항원(HBsAg)기인적중조선상관병독(rAAV)병관찰목적기인적표체화공능.방법채용PCR법종PTHBV-1질립중확증HBsAg기인(ayw아형);장PCR확증산물삽입선상관병독(AAV)표체질립pSNAV중,구건중조질립pSNAV-HBsAg;용지질체전염적방법장중조질립전입BHK-21세포중,G418사선득도전입중조질립병능표체목적기인적세포계BHK-HBsAg;용구유rAAV포장공능적HSV-1-HSV1-rc/△UL2감염BHK-HBsAg,순화후득도rAAV-HBsAg;ELISA검측중조병독표면항원기인재BHK-21세포화293세포중적표체;용rAAV-HBsAg면역BalB/C소서,RIA법검측혈청중표면항체적적도.결과ELISA법검측도혼합세포계BHK-HBsAg중HBsAg적표체량위(28.6±6.7)ng/5×106세포;rAAV-HBsAg감염BHK-21세포화293세포후균능검측도HBsAg적표체,표체량수감염복수적증가이승고;rAAV-HBsAg면역적BalB/C소서능산생표면항체(항-HBs항체).결론rAAV-HBsAg재체외능표체,면역동물능유도체액면역반응적산생.rAAV-HBsAg유희망성위을형간염후선역묘,야가이진일보용우탐색만성을형간염적면역치료.