微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2000年
6期
573-578
,共6页
丁之铨%张杰%宋福平%黄大昉%李季伦
丁之銓%張傑%宋福平%黃大昉%李季倫
정지전%장걸%송복평%황대방%리계륜
荧光假单胞菌%杀虫晶体蛋白%cry1Ac基因%cry2Aa基因%增效作用
熒光假單胞菌%殺蟲晶體蛋白%cry1Ac基因%cry2Aa基因%增效作用
형광가단포균%살충정체단백%cry1Ac기인%cry2Aa기인%증효작용
利用广宿主质粒载体pJMSα-lac将苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis)杀虫晶体蛋白基因cry1Ac和cry2Aa基因分别及一起进行克隆,将重组质粒导入能在多种作物上定殖、对植物病菌有良好抑菌和防治作用的荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorescens)P303菌株,分别得到工程菌株IPP101、IPP201和IPP202.PCR-RFLP和Southernblot检测均证明目的基因已经导入了工程菌.SDSPAGE电泳显示工程菌中存在明显的Cry1Ac蛋白带;透射电镜观察发现含cry1Ac基因的两个菌株IPP101和IPP202中杀虫蛋白形成了典型的菱形晶体和蛋白包含体,而在野生P303菌株中均无这些结构.这些结果说明,工程菌中cry1Ac基因得到了很好表达.室内杀虫试验表明:工程菌对棉铃虫初孵幼虫的致死中浓度(LC50),只含cry1Ac的IPP101为0.00812mL/g饲料,只含cry2Aa的IPP201为0.02604mL/g饲料,含双基因的IPP202为0.00186mL/g饲料;HD73为0.00170mL/g饲料.cry1Ac和cry2Aa双基因表达产物具有显著增效作用,共毒系数达332.8.
利用廣宿主質粒載體pJMSα-lac將囌雲金芽胞桿菌(Bacillusthuringiensis)殺蟲晶體蛋白基因cry1Ac和cry2Aa基因分彆及一起進行剋隆,將重組質粒導入能在多種作物上定殖、對植物病菌有良好抑菌和防治作用的熒光假單胞菌(Pseudomonasfluorescens)P303菌株,分彆得到工程菌株IPP101、IPP201和IPP202.PCR-RFLP和Southernblot檢測均證明目的基因已經導入瞭工程菌.SDSPAGE電泳顯示工程菌中存在明顯的Cry1Ac蛋白帶;透射電鏡觀察髮現含cry1Ac基因的兩箇菌株IPP101和IPP202中殺蟲蛋白形成瞭典型的蔆形晶體和蛋白包含體,而在野生P303菌株中均無這些結構.這些結果說明,工程菌中cry1Ac基因得到瞭很好錶達.室內殺蟲試驗錶明:工程菌對棉鈴蟲初孵幼蟲的緻死中濃度(LC50),隻含cry1Ac的IPP101為0.00812mL/g飼料,隻含cry2Aa的IPP201為0.02604mL/g飼料,含雙基因的IPP202為0.00186mL/g飼料;HD73為0.00170mL/g飼料.cry1Ac和cry2Aa雙基因錶達產物具有顯著增效作用,共毒繫數達332.8.
이용엄숙주질립재체pJMSα-lac장소운금아포간균(Bacillusthuringiensis)살충정체단백기인cry1Ac화cry2Aa기인분별급일기진행극륭,장중조질립도입능재다충작물상정식、대식물병균유량호억균화방치작용적형광가단포균(Pseudomonasfluorescens)P303균주,분별득도공정균주IPP101、IPP201화IPP202.PCR-RFLP화Southernblot검측균증명목적기인이경도입료공정균.SDSPAGE전영현시공정균중존재명현적Cry1Ac단백대;투사전경관찰발현함cry1Ac기인적량개균주IPP101화IPP202중살충단백형성료전형적릉형정체화단백포함체,이재야생P303균주중균무저사결구.저사결과설명,공정균중cry1Ac기인득도료흔호표체.실내살충시험표명:공정균대면령충초부유충적치사중농도(LC50),지함cry1Ac적IPP101위0.00812mL/g사료,지함cry2Aa적IPP201위0.02604mL/g사료,함쌍기인적IPP202위0.00186mL/g사료;HD73위0.00170mL/g사료.cry1Ac화cry2Aa쌍기인표체산물구유현저증효작용,공독계수체332.8.
