基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2003年
2期
141-145
,共5页
严景华%叶棋浓%钟红君%朱建华%黄翠芬
嚴景華%葉棋濃%鐘紅君%硃建華%黃翠芬
엄경화%협기농%종홍군%주건화%황취분
BRCA1%BRCT%融合表达%纯化
BRCA1%BRCT%融閤錶達%純化
BRCA1%BRCT%융합표체%순화
乳腺癌易感基因BRCA1在乳腺癌发生、发展中起着重要作用.在其C-末段有两个串联重复的BRCT(BRCT1和BRCT2)结构域.它们与BRCA1的重要功能密切相关,BRCT结构域还存在于其它50多种蛋白中.本文用PCR方法扩增了BRCT1和BRCT2结构域编码序列,并将其以正确相位与pGEX-2T载体中的GST编码序列融合,构建成重组质粒pGST-BRCT1和pGST-BRCT2.将这两种重组质粒分别转化E.coli DH5α后,分别表达了GST-BRCT1和GST-BRCT2两种融合蛋白.Western blot检测结果表明,两种融合蛋白均能与GST抗体反应.表达的GST-BRCT1和GST-BRCT2经GST-Sepharose 4B亲和层析获得了纯化的融合蛋白,为BRCT结构域及其相关蛋白功能研究提供了有用的材料.
乳腺癌易感基因BRCA1在乳腺癌髮生、髮展中起著重要作用.在其C-末段有兩箇串聯重複的BRCT(BRCT1和BRCT2)結構域.它們與BRCA1的重要功能密切相關,BRCT結構域還存在于其它50多種蛋白中.本文用PCR方法擴增瞭BRCT1和BRCT2結構域編碼序列,併將其以正確相位與pGEX-2T載體中的GST編碼序列融閤,構建成重組質粒pGST-BRCT1和pGST-BRCT2.將這兩種重組質粒分彆轉化E.coli DH5α後,分彆錶達瞭GST-BRCT1和GST-BRCT2兩種融閤蛋白.Western blot檢測結果錶明,兩種融閤蛋白均能與GST抗體反應.錶達的GST-BRCT1和GST-BRCT2經GST-Sepharose 4B親和層析穫得瞭純化的融閤蛋白,為BRCT結構域及其相關蛋白功能研究提供瞭有用的材料.
유선암역감기인BRCA1재유선암발생、발전중기착중요작용.재기C-말단유량개천련중복적BRCT(BRCT1화BRCT2)결구역.타문여BRCA1적중요공능밀절상관,BRCT결구역환존재우기타50다충단백중.본문용PCR방법확증료BRCT1화BRCT2결구역편마서렬,병장기이정학상위여pGEX-2T재체중적GST편마서렬융합,구건성중조질립pGST-BRCT1화pGST-BRCT2.장저량충중조질립분별전화E.coli DH5α후,분별표체료GST-BRCT1화GST-BRCT2량충융합단백.Western blot검측결과표명,량충융합단백균능여GST항체반응.표체적GST-BRCT1화GST-BRCT2경GST-Sepharose 4B친화층석획득료순화적융합단백,위BRCT결구역급기상관단백공능연구제공료유용적재료.
