安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2010年
14期
7363-7365
,共3页
苏世云%夏俊保%赵俊%吴琼%王明丽
囌世雲%夏俊保%趙俊%吳瓊%王明麗
소세운%하준보%조준%오경%왕명려
重组蛋白%猪α干扰素%层析
重組蛋白%豬α榦擾素%層析
중조단백%저α간우소%층석
[目的]研究重组猪干扰素α的纯化工艺,为进一步研究该蛋白的分子结构及rPoIFN-α标准品的制备奠定基础.[方法]将含重组菌E.coli BL21诱导表达后得到的粗制rPoIFN-α,分别用2种方案进行纯化.方案1,依次用GST亲和层析法、DEAE阴离子交换法及分子筛法层析三步法进行纯化;方案2,依次用GST亲和层析和分子筛法层析两步法进行纯化.纯化结果用SDS-PAGE及Western-blot进行纯度检测及鉴定.[结果]诱导表达后的表达产物经SDS-PAGE检测,发现在45 Kd分子量处有目的条带,Western-blot检测有特异性条带.通过两步法纯化后的rPoIFN-α纯度达96%,蛋白得率为42.8%,三步纯化纯度为98.8%.[结论]两步法得到的蛋白纯度非常接近三步法,但与三步法相比工艺更为简单方便.
[目的]研究重組豬榦擾素α的純化工藝,為進一步研究該蛋白的分子結構及rPoIFN-α標準品的製備奠定基礎.[方法]將含重組菌E.coli BL21誘導錶達後得到的粗製rPoIFN-α,分彆用2種方案進行純化.方案1,依次用GST親和層析法、DEAE陰離子交換法及分子篩法層析三步法進行純化;方案2,依次用GST親和層析和分子篩法層析兩步法進行純化.純化結果用SDS-PAGE及Western-blot進行純度檢測及鑒定.[結果]誘導錶達後的錶達產物經SDS-PAGE檢測,髮現在45 Kd分子量處有目的條帶,Western-blot檢測有特異性條帶.通過兩步法純化後的rPoIFN-α純度達96%,蛋白得率為42.8%,三步純化純度為98.8%.[結論]兩步法得到的蛋白純度非常接近三步法,但與三步法相比工藝更為簡單方便.
[목적]연구중조저간우소α적순화공예,위진일보연구해단백적분자결구급rPoIFN-α표준품적제비전정기출.[방법]장함중조균E.coli BL21유도표체후득도적조제rPoIFN-α,분별용2충방안진행순화.방안1,의차용GST친화층석법、DEAE음리자교환법급분자사법층석삼보법진행순화;방안2,의차용GST친화층석화분자사법층석량보법진행순화.순화결과용SDS-PAGE급Western-blot진행순도검측급감정.[결과]유도표체후적표체산물경SDS-PAGE검측,발현재45 Kd분자량처유목적조대,Western-blot검측유특이성조대.통과량보법순화후적rPoIFN-α순도체96%,단백득솔위42.8%,삼보순화순도위98.8%.[결론]량보법득도적단백순도비상접근삼보법,단여삼보법상비공예경위간단방편.
