南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2010年
7期
1491-1495
,共5页
龙虎%姚伦广%王姗姗%陈士新%谭佩婵%孙京臣
龍虎%姚倫廣%王姍姍%陳士新%譚珮嬋%孫京臣
룡호%요륜엄%왕산산%진사신%담패선%손경신
轮状病毒样颗粒%家蚕杆状病毒%多基因表达系统%BmN细胞%疫苗
輪狀病毒樣顆粒%傢蠶桿狀病毒%多基因錶達繫統%BmN細胞%疫苗
륜상병독양과립%가잠간상병독%다기인표체계통%BmN세포%역묘
目的 构建能同时表达轮状病毒vp2、vp6、vp7基因的重组家蚕杆状病毒,并在BmN细胞中进行初步表达.方法 利用MA104细胞繁殖人A组轮状病毒,RT-PCR扩增病毒结构蛋白vp2、vp6、vp7基因,连接至转移载体pFBDM和pUCDM中,同时引入含IE1启动子的绿色荧光蛋白基因利于检测感染和表达量,再分别通过Tn7及Cre-LoxP重组构建重组病毒.为方便检测基因的表达,在VP7的C-末端添加6-组氨酸(6-His)标签,可通过ELISA等方法快速检测目的 基因表达.结果 扩增获得了轮状病毒三个结构蛋白基因,构建了能高效组装轮状病毒样颗粒的重组表达载体,ELISA检测VP7得到了表达,在BmN细胞中观察到病毒样颗粒.结论 成功构建杆状病毒多基因的表达系统,为生产多哑基蛋白复合物,研究大分子结构提供借鉴.
目的 構建能同時錶達輪狀病毒vp2、vp6、vp7基因的重組傢蠶桿狀病毒,併在BmN細胞中進行初步錶達.方法 利用MA104細胞繁殖人A組輪狀病毒,RT-PCR擴增病毒結構蛋白vp2、vp6、vp7基因,連接至轉移載體pFBDM和pUCDM中,同時引入含IE1啟動子的綠色熒光蛋白基因利于檢測感染和錶達量,再分彆通過Tn7及Cre-LoxP重組構建重組病毒.為方便檢測基因的錶達,在VP7的C-末耑添加6-組氨痠(6-His)標籤,可通過ELISA等方法快速檢測目的 基因錶達.結果 擴增穫得瞭輪狀病毒三箇結構蛋白基因,構建瞭能高效組裝輪狀病毒樣顆粒的重組錶達載體,ELISA檢測VP7得到瞭錶達,在BmN細胞中觀察到病毒樣顆粒.結論 成功構建桿狀病毒多基因的錶達繫統,為生產多啞基蛋白複閤物,研究大分子結構提供藉鑒.
목적 구건능동시표체륜상병독vp2、vp6、vp7기인적중조가잠간상병독,병재BmN세포중진행초보표체.방법 이용MA104세포번식인A조륜상병독,RT-PCR확증병독결구단백vp2、vp6、vp7기인,련접지전이재체pFBDM화pUCDM중,동시인입함IE1계동자적록색형광단백기인리우검측감염화표체량,재분별통과Tn7급Cre-LoxP중조구건중조병독.위방편검측기인적표체,재VP7적C-말단첨가6-조안산(6-His)표첨,가통과ELISA등방법쾌속검측목적 기인표체.결과 확증획득료륜상병독삼개결구단백기인,구건료능고효조장륜상병독양과립적중조표체재체,ELISA검측VP7득도료표체,재BmN세포중관찰도병독양과립.결론 성공구건간상병독다기인적표체계통,위생산다아기단백복합물,연구대분자결구제공차감.
