中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2002年
2期
240-244
,共5页
王丽影%雷群英%戴振宇%陈伉俪%陈惠黎%查锡良
王麗影%雷群英%戴振宇%陳伉儷%陳惠黎%查錫良
왕려영%뢰군영%대진우%진항려%진혜려%사석량
N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V%粘着斑激酶%蛋白激酶B%失巢凋亡
N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶V%粘著斑激酶%蛋白激酶B%失巢凋亡
N-을선안기포도당전이매V%점착반격매%단백격매B%실소조망
为了探讨过表达N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V(GnT-V)后7721细胞侵袭、迁移等行为改变的机制,检测了GnT-V/7721及pcDNA3/7721两组细胞中与恶性表型密切相关的粘着斑激酶(focal ad-hesion kinase,FAK)、PTEN蛋白、蛋白激酶B(PKB)等重要信号分子的表达水平,同时测定了2组细胞非贴壁依赖生长的能力.利用Western印迹方法检测FAK、PTEN、PKB的表达或磷酸化水平.利用poly-hema使细胞非贴壁生长,2组细胞悬浮无血清培养20 h,采用流式细胞仪方法检测细胞的失巢凋亡(anoikis).研究发现,转染GnT-V后的肝癌细胞的FAK表达无明显变化,FAK的酪氨酸磷酸化水平增高70%;而PTEN的表达下降了49%;PKB的磷酸化增加200%;pcDNA3/7721细胞已有明显凋亡,而转染GnT-V的7721细胞未发生凋亡.结果提示,转染GnT-V后的肝癌细胞迁移力增强,可能与其FAK的磷酸化程度升高,激酶活力增强有关;而能逃逸失巢凋亡是因为PTEN的表达下降,PTEN蛋白的磷酸酶活性降低,细胞Akt/PKB磷酸化水平保持在较高水平.
為瞭探討過錶達N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶V(GnT-V)後7721細胞侵襲、遷移等行為改變的機製,檢測瞭GnT-V/7721及pcDNA3/7721兩組細胞中與噁性錶型密切相關的粘著斑激酶(focal ad-hesion kinase,FAK)、PTEN蛋白、蛋白激酶B(PKB)等重要信號分子的錶達水平,同時測定瞭2組細胞非貼壁依賴生長的能力.利用Western印跡方法檢測FAK、PTEN、PKB的錶達或燐痠化水平.利用poly-hema使細胞非貼壁生長,2組細胞懸浮無血清培養20 h,採用流式細胞儀方法檢測細胞的失巢凋亡(anoikis).研究髮現,轉染GnT-V後的肝癌細胞的FAK錶達無明顯變化,FAK的酪氨痠燐痠化水平增高70%;而PTEN的錶達下降瞭49%;PKB的燐痠化增加200%;pcDNA3/7721細胞已有明顯凋亡,而轉染GnT-V的7721細胞未髮生凋亡.結果提示,轉染GnT-V後的肝癌細胞遷移力增彊,可能與其FAK的燐痠化程度升高,激酶活力增彊有關;而能逃逸失巢凋亡是因為PTEN的錶達下降,PTEN蛋白的燐痠酶活性降低,細胞Akt/PKB燐痠化水平保持在較高水平.
위료탐토과표체N-을선안기포도당전이매V(GnT-V)후7721세포침습、천이등행위개변적궤제,검측료GnT-V/7721급pcDNA3/7721량조세포중여악성표형밀절상관적점착반격매(focal ad-hesion kinase,FAK)、PTEN단백、단백격매B(PKB)등중요신호분자적표체수평,동시측정료2조세포비첩벽의뢰생장적능력.이용Western인적방법검측FAK、PTEN、PKB적표체혹린산화수평.이용poly-hema사세포비첩벽생장,2조세포현부무혈청배양20 h,채용류식세포의방법검측세포적실소조망(anoikis).연구발현,전염GnT-V후적간암세포적FAK표체무명현변화,FAK적락안산린산화수평증고70%;이PTEN적표체하강료49%;PKB적린산화증가200%;pcDNA3/7721세포이유명현조망,이전염GnT-V적7721세포미발생조망.결과제시,전염GnT-V후적간암세포천이력증강,가능여기FAK적린산화정도승고,격매활력증강유관;이능도일실소조망시인위PTEN적표체하강,PTEN단백적린산매활성강저,세포Akt/PKB린산화수평보지재교고수평.
