CAJ | 학술논문

目的研究IL-18在大肠杆菌中高效表达及纯化工艺,并诱导KG-1细胞产生IFN-γ.方法利用RT-nPCR从正常人胎肝组织中扩增获得人IL-18基因, 克隆于pThiohisA载体,转化宿主菌BL-21,1mmol/L IPTG诱导,表达产物以包涵体形式存在,经2%Triton X-100洗涤,在8mol/L尿素下变性阴离子柱层析,透析复性后再经凝胶过滤纯化,通过纯化产物诱导人骨髓瘤单核细胞KG-1(ATCC CCL-246)产生 IFN-γ,并检测其生物学活性.结果获得了在大肠杆菌中的稳定高效表达,表达的目的蛋白占菌体总蛋白的25%左右,纯化后纯度可达95%以上,具有显著的刺激细胞产生IFN-γ的活性.结论制备具有生物学活性高纯度的rhIL-18方法的建立,为基础研究与临床应用开发奠定了基础.
목적연구IL-18재대장간균중고효표체급순화공예,병유도KG-1세포산생IFN-γ.방법이용RT-nPCR종정상인태간조직중확증획득인IL-18기인, 극륭우pThiohisA재체,전화숙주균BL-21,1mmol/L IPTG유도,표체산물이포함체형식존재,경2%Triton X-100세조,재8mol/L뇨소하변성음리자주층석,투석복성후재경응효과려순화,통과순화산물유도인골수류단핵세포KG-1(ATCC CCL-246)산생 IFN-γ,병검측기생물학활성.결과획득료재대장간균중적은정고효표체,표체적목적단백점균체총단백적25%좌우,순화후순도가체95%이상,구유현저적자격세포산생IFN-γ적활성.결론제비구유생물학활성고순도적rhIL-18방법적건립,위기출연구여림상응용개발전정료기출.