遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2002年
1期
9-14
,共6页
曹阳%高华颖%于黎%袁晓东%李庆伟%汤敏谦%安利佳
曹暘%高華穎%于黎%袁曉東%李慶偉%湯敏謙%安利佳
조양%고화영%우려%원효동%리경위%탕민겸%안리가
人乳铁蛋白%脂质体%固定化%细胞表达
人乳鐵蛋白%脂質體%固定化%細胞錶達
인유철단백%지질체%고정화%세포표체
通过PCR法直接克隆了2.366kb的人乳铁蛋白基因cDNA序列及800bp的山羊β∕乳球蛋白基因5′端调控序列,并连接到表达载体pLNCX中.利用脂质体包裹含人乳铁蛋白基因cDNA的重组质粒pLNCXHLF,并导入到小鼠乳腺癌细胞株MA∕782中,G418及PCR筛选获得阳性单克隆细胞,增殖后,转染细胞利用海藻酸钠固定化包埋培养,经激素诱导,培养液上清通过Western印记检测证明,转染细胞表达并分泌出人乳铁蛋白,分子质量为34kDa;ELISA法测出,每升培养基(含105个细胞)重组蛋白最高表达量为65mg;抗菌实验表明,所获得的重组人乳铁蛋白具有抑制大肠杆菌生长的作用,而且比人乳铁蛋白标准品作用更强.
通過PCR法直接剋隆瞭2.366kb的人乳鐵蛋白基因cDNA序列及800bp的山羊β∕乳毬蛋白基因5′耑調控序列,併連接到錶達載體pLNCX中.利用脂質體包裹含人乳鐵蛋白基因cDNA的重組質粒pLNCXHLF,併導入到小鼠乳腺癌細胞株MA∕782中,G418及PCR篩選穫得暘性單剋隆細胞,增殖後,轉染細胞利用海藻痠鈉固定化包埋培養,經激素誘導,培養液上清通過Western印記檢測證明,轉染細胞錶達併分泌齣人乳鐵蛋白,分子質量為34kDa;ELISA法測齣,每升培養基(含105箇細胞)重組蛋白最高錶達量為65mg;抗菌實驗錶明,所穫得的重組人乳鐵蛋白具有抑製大腸桿菌生長的作用,而且比人乳鐵蛋白標準品作用更彊.
통과PCR법직접극륭료2.366kb적인유철단백기인cDNA서렬급800bp적산양β∕유구단백기인5′단조공서렬,병련접도표체재체pLNCX중.이용지질체포과함인유철단백기인cDNA적중조질립pLNCXHLF,병도입도소서유선암세포주MA∕782중,G418급PCR사선획득양성단극륭세포,증식후,전염세포이용해조산납고정화포매배양,경격소유도,배양액상청통과Western인기검측증명,전염세포표체병분비출인유철단백,분자질량위34kDa;ELISA법측출,매승배양기(함105개세포)중조단백최고표체량위65mg;항균실험표명,소획득적중조인유철단백구유억제대장간균생장적작용,이차비인유철단백표준품작용경강.
