中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE
2001年
6期
590-593
,共4页
乐耕耘%吴娟%马雁冰%杜瑞娟%庄俊英%谢天宏%李春宏%戴长柏%孙茂盛
樂耕耘%吳娟%馬雁冰%杜瑞娟%莊俊英%謝天宏%李春宏%戴長柏%孫茂盛
악경운%오연%마안빙%두서연%장준영%사천굉%리춘굉%대장백%손무성
戊型肝炎病毒%细胞传代%RT-PCR
戊型肝炎病毒%細胞傳代%RT-PCR
무형간염병독%세포전대%RT-PCR
目的探索戊型肝炎病毒(HEV)敏感细胞及体外培养条件,为HEV体外研究提供基础.方法用戊肝患者急性期阳性粪便悬液感染恒河猴进行毒种的扩增与活化,超速离心处理猴阳性粪便标本获取培养用毒种,将其接种于各种人源性细胞(包括人胚肺二倍体细胞KMB17、人肺癌细胞A549、人肝癌细胞BEL7402、人宫颈癌细胞Hela)和非人灵长类细胞(非洲绿猴肾细胞Vero),通过细胞病变观察、RT-PCR检测及免疫荧光实验来判定细胞是否对HEV敏感.结果 KMB17、A549、BEL7402细胞中第一代传代7～9 d出现细胞病变,11～13 d脱落,传至10代仍可经正链和负链RT-PCR检测到HEV基因组正链RNA和复制的负链RNA的存在,而Hela、Vero细胞未见细胞病变,分别于2-4代后经RT-PCR不能扩增到特异片段.在KMB17细胞培养体系中经免疫荧光实验表明实验组有明显荧光着色,病毒捕获RT-PCR扩增到特异片段.结论在采用的培养条件下,KMB17、A549、BEL7402细胞对HEV敏感,而Hela、Vero细胞不敏感,本研究建立了一定代次内HEV组织培养体系.
目的探索戊型肝炎病毒(HEV)敏感細胞及體外培養條件,為HEV體外研究提供基礎.方法用戊肝患者急性期暘性糞便懸液感染恆河猴進行毒種的擴增與活化,超速離心處理猴暘性糞便標本穫取培養用毒種,將其接種于各種人源性細胞(包括人胚肺二倍體細胞KMB17、人肺癌細胞A549、人肝癌細胞BEL7402、人宮頸癌細胞Hela)和非人靈長類細胞(非洲綠猴腎細胞Vero),通過細胞病變觀察、RT-PCR檢測及免疫熒光實驗來判定細胞是否對HEV敏感.結果 KMB17、A549、BEL7402細胞中第一代傳代7～9 d齣現細胞病變,11～13 d脫落,傳至10代仍可經正鏈和負鏈RT-PCR檢測到HEV基因組正鏈RNA和複製的負鏈RNA的存在,而Hela、Vero細胞未見細胞病變,分彆于2-4代後經RT-PCR不能擴增到特異片段.在KMB17細胞培養體繫中經免疫熒光實驗錶明實驗組有明顯熒光著色,病毒捕穫RT-PCR擴增到特異片段.結論在採用的培養條件下,KMB17、A549、BEL7402細胞對HEV敏感,而Hela、Vero細胞不敏感,本研究建立瞭一定代次內HEV組織培養體繫.
목적탐색무형간염병독(HEV)민감세포급체외배양조건,위HEV체외연구제공기출.방법용무간환자급성기양성분편현액감염항하후진행독충적확증여활화,초속리심처리후양성분편표본획취배양용독충,장기접충우각충인원성세포(포괄인배폐이배체세포KMB17、인폐암세포A549、인간암세포BEL7402、인궁경암세포Hela)화비인령장류세포(비주록후신세포Vero),통과세포병변관찰、RT-PCR검측급면역형광실험래판정세포시부대HEV민감.결과 KMB17、A549、BEL7402세포중제일대전대7～9 d출현세포병변,11～13 d탈락,전지10대잉가경정련화부련RT-PCR검측도HEV기인조정련RNA화복제적부련RNA적존재,이Hela、Vero세포미견세포병변,분별우2-4대후경RT-PCR불능확증도특이편단.재KMB17세포배양체계중경면역형광실험표명실험조유명현형광착색,병독포획RT-PCR확증도특이편단.결론재채용적배양조건하,KMB17、A549、BEL7402세포대HEV민감,이Hela、Vero세포불민감,본연구건립료일정대차내HEV조직배양체계.
