CAJ | 학술논문

为了探讨恶性肿瘤基因治疗的新靶点,本研究以vegfr-2的mRNA为靶点,设计、构建vegfr-2 shRNA的真核表达载体,用脂质体法将重组质粒转染人非小细胞肺癌A549细胞,用RT-PCR法及Western blot分别检测重组质粒对该基因mRNA和蛋白表达的抑制效果,应用CCK-8法检测细胞增殖、抑制情况,Hoechst染色法检测细胞凋亡形态学变化.结果表明:与空白对照、空质粒对照及scramble对照相比,干扰组shRNA能有效地降解vegfr-2 mRNA,尤其转染pGenesil-1-vegfr-2-shRNA-1质粒组内源性vegfr-2 mRNA及蛋白减少更显著;在不同时间点转染干扰质粒组的A值均降低,转染后72小时抑制率最高,干扰组与空质粒组和空白对照组相比,对细胞生长抑制作用的差异有统计学意义(P<0.01);Hoechst荧光染色显示,转染48小时后在荧光显微镜下干扰组细胞呈典型的细胞凋亡形态.结论:vegfr-2 shRNA真核表达载体可序列特异性下调A549细胞的基因转录和表达,有效抑制细胞增殖和诱导凋亡,提示VEGF/VEGFR-2信号通路可作为恶性肿瘤基因治疗和功能研究的理想靶点.
위료탐토악성종류기인치료적신파점,본연구이vegfr-2적mRNA위파점,설계、구건vegfr-2 shRNA적진핵표체재체,용지질체법장중조질립전염인비소세포폐암A549세포,용RT-PCR법급Western blot분별검측중조질립대해기인mRNA화단백표체적억제효과,응용CCK-8법검측세포증식、억제정황,Hoechst염색법검측세포조망형태학변화.결과표명:여공백대조、공질립대조급scramble대조상비,간우조shRNA능유효지강해vegfr-2 mRNA,우기전염pGenesil-1-vegfr-2-shRNA-1질립조내원성vegfr-2 mRNA급단백감소경현저;재불동시간점전염간우질립조적A치균강저,전염후72소시억제솔최고,간우조여공질립조화공백대조조상비,대세포생장억제작용적차이유통계학의의(P<0.01);Hoechst형광염색현시,전염48소시후재형광현미경하간우조세포정전형적세포조망형태.결론:vegfr-2 shRNA진핵표체재체가서렬특이성하조A549세포적기인전록화표체,유효억제세포증식화유도조망,제시VEGF/VEGFR-2신호통로가작위악성종류기인치료화공능연구적이상파점.