科学通报
科學通報
과학통보
CHINESE SCIENCE BULLETIN
2005年
10期
970-978
,共9页
王海华%郝中娜%谢科%吴坤陆%郭泽建
王海華%郝中娜%謝科%吳坤陸%郭澤建
왕해화%학중나%사과%오곤륙%곽택건
转录因子%亮氨酸拉链%DNA结合%WRKY蛋白%水稻
轉錄因子%亮氨痠拉鏈%DNA結閤%WRKY蛋白%水稻
전록인자%량안산랍련%DNA결합%WRKY단백%수도
WRKY蛋白是一类参与植物生物和非生物胁迫反应、代谢、发育等过程的转录调节因子.水稻WRKY89与其他的WRKY成员同源性较低,推测由263个氨基酸组成,其N端带1个可能的亮氨酸拉链结构.采用pET-29b载体原核表达了OsWRKY89和其3个N端缺失的衍生物,并采用Ni柱的方法对表达的蛋白进行了纯化.凝胶阻滞结果表明,OsWRKY89能与含顺式元件W盒的DNA序列特异结合,而缺失N端亮氨酸拉链的OsWRKY89与该元件的结合能力显著下降.酵母双杂交结果表明,亮氨酸拉链样结构参与OsWRKY89蛋白的同源相互作用.进一步缺失OsWRKY89至部分WRKY结构域导致表达的蛋白完全丧失与上述元件的结合活性,表明WRKY结构域是DNA结合中不可缺少的.这些结果说明亮氨酸拉链结构在蛋白质与蛋白质互作和DNA与蛋白质中起重要作用.
WRKY蛋白是一類參與植物生物和非生物脅迫反應、代謝、髮育等過程的轉錄調節因子.水稻WRKY89與其他的WRKY成員同源性較低,推測由263箇氨基痠組成,其N耑帶1箇可能的亮氨痠拉鏈結構.採用pET-29b載體原覈錶達瞭OsWRKY89和其3箇N耑缺失的衍生物,併採用Ni柱的方法對錶達的蛋白進行瞭純化.凝膠阻滯結果錶明,OsWRKY89能與含順式元件W盒的DNA序列特異結閤,而缺失N耑亮氨痠拉鏈的OsWRKY89與該元件的結閤能力顯著下降.酵母雙雜交結果錶明,亮氨痠拉鏈樣結構參與OsWRKY89蛋白的同源相互作用.進一步缺失OsWRKY89至部分WRKY結構域導緻錶達的蛋白完全喪失與上述元件的結閤活性,錶明WRKY結構域是DNA結閤中不可缺少的.這些結果說明亮氨痠拉鏈結構在蛋白質與蛋白質互作和DNA與蛋白質中起重要作用.
WRKY단백시일류삼여식물생물화비생물협박반응、대사、발육등과정적전록조절인자.수도WRKY89여기타적WRKY성원동원성교저,추측유263개안기산조성,기N단대1개가능적량안산랍련결구.채용pET-29b재체원핵표체료OsWRKY89화기3개N단결실적연생물,병채용Ni주적방법대표체적단백진행료순화.응효조체결과표명,OsWRKY89능여함순식원건W합적DNA서렬특이결합,이결실N단량안산랍련적OsWRKY89여해원건적결합능력현저하강.효모쌍잡교결과표명,량안산랍련양결구삼여OsWRKY89단백적동원상호작용.진일보결실OsWRKY89지부분WRKY결구역도치표체적단백완전상실여상술원건적결합활성,표명WRKY결구역시DNA결합중불가결소적.저사결과설명량안산랍련결구재단백질여단백질호작화DNA여단백질중기중요작용.
