中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2007年
1期
22-26
,共5页
任林柱%王兴龙%李莉%李晓艳%段小宇%梅英武%刘锴%王学理
任林柱%王興龍%李莉%李曉豔%段小宇%梅英武%劉鍇%王學理
임림주%왕흥룡%리리%리효염%단소우%매영무%류개%왕학리
口蹄疫病毒%基因组%全长cDNA
口蹄疫病毒%基因組%全長cDNA
구제역병독%기인조%전장cDNA
根据口蹄疫病毒基因组的结构特点以及GenBank上公布的全序列,用DNAMAN分别设计了涵盖整个基因组序列的3对引物,从接种口蹄疫病毒WFL株的细胞培养液中提取了病毒基因组RNA,采用RT-PCR方法和RACE法分别扩增了3条基因片段,并将扩增片段分别与T载体连接,在体外分别进行了5'半分子和3'半分子的构建.最后将5'半分子和3'半分子连接成基因组全长cDNA分子.经PCR鉴定、酶切鉴定及全长cDNA测序,证实成功构建了口蹄疫病毒WFL株基因组全长cDNA分子.序列分析结果表明,供试口蹄疫病毒基因组全长为8 155 nt,5'UTR长1 059 nt;具有一个大的读码框,其核苷酸长度为6 969 nt,包括201 aa的前导蛋白基因和2 122 aa的聚合蛋白基因;3'UTR长127 nt,包括34 nt的poly(A).
根據口蹄疫病毒基因組的結構特點以及GenBank上公佈的全序列,用DNAMAN分彆設計瞭涵蓋整箇基因組序列的3對引物,從接種口蹄疫病毒WFL株的細胞培養液中提取瞭病毒基因組RNA,採用RT-PCR方法和RACE法分彆擴增瞭3條基因片段,併將擴增片段分彆與T載體連接,在體外分彆進行瞭5'半分子和3'半分子的構建.最後將5'半分子和3'半分子連接成基因組全長cDNA分子.經PCR鑒定、酶切鑒定及全長cDNA測序,證實成功構建瞭口蹄疫病毒WFL株基因組全長cDNA分子.序列分析結果錶明,供試口蹄疫病毒基因組全長為8 155 nt,5'UTR長1 059 nt;具有一箇大的讀碼框,其覈苷痠長度為6 969 nt,包括201 aa的前導蛋白基因和2 122 aa的聚閤蛋白基因;3'UTR長127 nt,包括34 nt的poly(A).
근거구제역병독기인조적결구특점이급GenBank상공포적전서렬,용DNAMAN분별설계료함개정개기인조서렬적3대인물,종접충구제역병독WFL주적세포배양액중제취료병독기인조RNA,채용RT-PCR방법화RACE법분별확증료3조기인편단,병장확증편단분별여T재체련접,재체외분별진행료5'반분자화3'반분자적구건.최후장5'반분자화3'반분자련접성기인조전장cDNA분자.경PCR감정、매절감정급전장cDNA측서,증실성공구건료구제역병독WFL주기인조전장cDNA분자.서렬분석결과표명,공시구제역병독기인조전장위8 155 nt,5'UTR장1 059 nt;구유일개대적독마광,기핵감산장도위6 969 nt,포괄201 aa적전도단백기인화2 122 aa적취합단백기인;3'UTR장127 nt,포괄34 nt적poly(A).
