CAJ | 학술논문

目的:分离大鼠脂肪和骨髓来源的间充质干细胞,比较两种间充质干细胞的生物学特征.方法:实验于2003-09/2006-11在广州市第一人民医院、湘雅医院中心实验室完成.取SD大鼠的股骨、胫骨、肱骨及腹股沟处脂肪垫进行骨髓间充质干细胞与脂肪间充质干细胞的分离.将骨髓间充质干细胞和脂肪间充质干细胞在含10%血清,1%双抗的低糖DMEM培养基,37℃、体积分数为0.05的CO2条件下进行培养.在细胞达到80%～90%融合时,使用0.25%胰酶消化传代.传代至第3代使用倒置显微镜观察骨髓和脂肪两种不同来源细胞的传代后的形态、贴壁、生长增殖、集落等情况.取消化传3代的两种细胞分别制成单细胞悬液进行细胞贴壁率的检测,贴壁率=贴壁细胞总数/接种细胞总数×100%.取第2代和第5代骨髓间充质干细胞和脂肪间充质干细胞以1×107 L-1密度培养.每天同一时间,随机抽取5孔细胞,加入5%噻唑兰20 μL/孔,培养4～6 h,吸出孔内液体,每孔加150 μL二甲基亚砜震荡10 min,酶联免疫测定仪测定波长490 nm处的吸光度,取5孔吸光度的均值,以时间为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制生长曲线.采用流式细胞仪检测细胞表面CD29、CD34、CD44标记,免疫化学检测细胞CD29、CD34、CD44.结果:①在单位质量骨髓和脂肪组织中获得的间充质干细胞数量相当.两种细胞形态均为条索样,呈成纤维细胞形态.②应用直线相关分析,考察骨髓贴壁率与脂肪贴壁率之间的关系,相关系数r=0.999,决定系数r2=0.997(F=5 862.949,P＜0.001),两贴壁率之间有直线相关关系,不同的时间点两种细胞的贴壁率相似,并且有同向变化的趋势.③脂肪间充质干细胞的增殖能力与骨髓间充质干细胞相当.④脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞表面表达CD29、CD44,不表达CD34.结论:自大鼠脂肪中可提取出与骨髓间充质干细胞生物学特征类似的脂肪间充质干细胞. 目的:分離大鼠脂肪和骨髓來源的間充質榦細胞,比較兩種間充質榦細胞的生物學特徵.方法:實驗于2003-09/2006-11在廣州市第一人民醫院、湘雅醫院中心實驗室完成.取SD大鼠的股骨、脛骨、肱骨及腹股溝處脂肪墊進行骨髓間充質榦細胞與脂肪間充質榦細胞的分離.將骨髓間充質榦細胞和脂肪間充質榦細胞在含10%血清,1%雙抗的低糖DMEM培養基,37℃、體積分數為0.05的CO2條件下進行培養.在細胞達到80%～90%融閤時,使用0.25%胰酶消化傳代.傳代至第3代使用倒置顯微鏡觀察骨髓和脂肪兩種不同來源細胞的傳代後的形態、貼壁、生長增殖、集落等情況.取消化傳3代的兩種細胞分彆製成單細胞懸液進行細胞貼壁率的檢測,貼壁率=貼壁細胞總數/接種細胞總數×100%.取第2代和第5代骨髓間充質榦細胞和脂肪間充質榦細胞以1×107 L-1密度培養.每天同一時間,隨機抽取5孔細胞,加入5%噻唑蘭20 μL/孔,培養4～6 h,吸齣孔內液體,每孔加150 μL二甲基亞砜震盪10 min,酶聯免疫測定儀測定波長490 nm處的吸光度,取5孔吸光度的均值,以時間為橫坐標,吸光度值為縱坐標,繪製生長麯線.採用流式細胞儀檢測細胞錶麵CD29、CD34、CD44標記,免疫化學檢測細胞CD29、CD34、CD44.結果:①在單位質量骨髓和脂肪組織中穫得的間充質榦細胞數量相噹.兩種細胞形態均為條索樣,呈成纖維細胞形態.②應用直線相關分析,攷察骨髓貼壁率與脂肪貼壁率之間的關繫,相關繫數r=0.999,決定繫數r2=0.997(F=5 862.949,P＜0.001),兩貼壁率之間有直線相關關繫,不同的時間點兩種細胞的貼壁率相似,併且有同嚮變化的趨勢.③脂肪間充質榦細胞的增殖能力與骨髓間充質榦細胞相噹.④脂肪間充質榦細胞和骨髓間充質榦細胞錶麵錶達CD29、CD44,不錶達CD34.結論:自大鼠脂肪中可提取齣與骨髓間充質榦細胞生物學特徵類似的脂肪間充質榦細胞.
목적:분리대서지방화골수래원적간충질간세포,비교량충간충질간세포적생물학특정.방법:실험우2003-09/2006-11재엄주시제일인민의원、상아의원중심실험실완성.취SD대서적고골、경골、굉골급복고구처지방점진행골수간충질간세포여지방간충질간세포적분리.장골수간충질간세포화지방간충질간세포재함10%혈청,1%쌍항적저당DMEM배양기,37℃、체적분수위0.05적CO2조건하진행배양.재세포체도80%～90%융합시,사용0.25%이매소화전대.전대지제3대사용도치현미경관찰골수화지방량충불동래원세포적전대후적형태、첩벽、생장증식、집락등정황.취소화전3대적량충세포분별제성단세포현액진행세포첩벽솔적검측,첩벽솔=첩벽세포총수/접충세포총수×100%.취제2대화제5대골수간충질간세포화지방간충질간세포이1×107 L-1밀도배양.매천동일시간,수궤추취5공세포,가입5%새서란20 μL/공,배양4～6 h,흡출공내액체,매공가150 μL이갑기아풍진탕10 min,매련면역측정의측정파장490 nm처적흡광도,취5공흡광도적균치,이시간위횡좌표,흡광도치위종좌표,회제생장곡선.채용류식세포의검측세포표면CD29、CD34、CD44표기,면역화학검측세포CD29、CD34、CD44.결과:①재단위질량골수화지방조직중획득적간충질간세포수량상당.량충세포형태균위조색양,정성섬유세포형태.②응용직선상관분석,고찰골수첩벽솔여지방첩벽솔지간적관계,상관계수r=0.999,결정계수r2=0.997(F=5 862.949,P＜0.001),량첩벽솔지간유직선상관관계,불동적시간점량충세포적첩벽솔상사,병차유동향변화적추세.③지방간충질간세포적증식능력여골수간충질간세포상당.④지방간충질간세포화골수간충질간세포표면표체CD29、CD44,불표체CD34.결론:자대서지방중가제취출여골수간충질간세포생물학특정유사적지방간충질간세포.