病毒学报
病毒學報
병독학보
CHINESE JOURNAL OF VIROLOGY
2007年
5期
389-393
,共5页
彭伍平%夏照和%侯强%李娜%孙元%童光志%仇华吉
彭伍平%夏照和%侯彊%李娜%孫元%童光誌%仇華吉
팽오평%하조화%후강%리나%손원%동광지%구화길
猪瘟病毒%E2囊膜糖蛋白%糖基化位点%杆状病毒表达系统%蜂素信号肽
豬瘟病毒%E2囊膜糖蛋白%糖基化位點%桿狀病毒錶達繫統%蜂素信號肽
저온병독%E2낭막당단백%당기화위점%간상병독표체계통%봉소신호태
猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株E2糖蛋白分别含有5个和6个潜在的糖基化位点,其中986N是兔化弱毒疫苗株所特有的.为了分析二者糖基化位点差异及其影响,将去掉信号肽和跨膜区的猪瘟病毒石门强毒株(Shimen)和兔化弱毒疫苗株(HCLV)E2基因置于蜂素信号肽序列下游,使其在Sf9细胞内表达重组Shimen-E2和HCLV-E2蛋白.结果显示,重组E2蛋白以二聚体的形式分泌表达于细胞培养液中,但二者分子量存在差异.用endo H和PNGase F对纯化后的重组E2蛋白进行去糖基化处理后,二者分子量大小变成一致,证实石门强毒株和兔化弱毒株E2蛋白分子量大小的差异可能是由于糖基化程度的差异所致.对986N糖基化位点进行定点突变后发现,突变后的Shimen-E2与野生型HCLV-E2分子量大小一致,而突变后的HCLV-E2与野生型Shimen-E2分子量大小一致,表明Shimen-E2和HCLV-E2分子量大小的差异的确是由于986N糖基化位点的差异引起的.
豬瘟病毒彊毒株和兔化弱毒疫苗株E2糖蛋白分彆含有5箇和6箇潛在的糖基化位點,其中986N是兔化弱毒疫苗株所特有的.為瞭分析二者糖基化位點差異及其影響,將去掉信號肽和跨膜區的豬瘟病毒石門彊毒株(Shimen)和兔化弱毒疫苗株(HCLV)E2基因置于蜂素信號肽序列下遊,使其在Sf9細胞內錶達重組Shimen-E2和HCLV-E2蛋白.結果顯示,重組E2蛋白以二聚體的形式分泌錶達于細胞培養液中,但二者分子量存在差異.用endo H和PNGase F對純化後的重組E2蛋白進行去糖基化處理後,二者分子量大小變成一緻,證實石門彊毒株和兔化弱毒株E2蛋白分子量大小的差異可能是由于糖基化程度的差異所緻.對986N糖基化位點進行定點突變後髮現,突變後的Shimen-E2與野生型HCLV-E2分子量大小一緻,而突變後的HCLV-E2與野生型Shimen-E2分子量大小一緻,錶明Shimen-E2和HCLV-E2分子量大小的差異的確是由于986N糖基化位點的差異引起的.
저온병독강독주화토화약독역묘주E2당단백분별함유5개화6개잠재적당기화위점,기중986N시토화약독역묘주소특유적.위료분석이자당기화위점차이급기영향,장거도신호태화과막구적저온병독석문강독주(Shimen)화토화약독역묘주(HCLV)E2기인치우봉소신호태서렬하유,사기재Sf9세포내표체중조Shimen-E2화HCLV-E2단백.결과현시,중조E2단백이이취체적형식분비표체우세포배양액중,단이자분자량존재차이.용endo H화PNGase F대순화후적중조E2단백진행거당기화처리후,이자분자량대소변성일치,증실석문강독주화토화약독주E2단백분자량대소적차이가능시유우당기화정도적차이소치.대986N당기화위점진행정점돌변후발현,돌변후적Shimen-E2여야생형HCLV-E2분자량대소일치,이돌변후적HCLV-E2여야생형Shimen-E2분자량대소일치,표명Shimen-E2화HCLV-E2분자량대소적차이적학시유우986N당기화위점적차이인기적.
