生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2010年
11期
134-136,152
,共4页
杨娇馥%王志钢%高连山%郝慧芳%李志伟%李洁%湛奎
楊嬌馥%王誌鋼%高連山%郝慧芳%李誌偉%李潔%湛奎
양교복%왕지강%고련산%학혜방%리지위%리길%담규
细粒棘球蚴%EG95基因%核酸疫苗
細粒棘毬蚴%EG95基因%覈痠疫苗
세립극구유%EG95기인%핵산역묘
克隆细粒棘球蚴EG95基因cDNA并构建核酸疫苗pcDNA3.1-EG95.根据GenBank中细粒棘球蚴EG95基因序列(AF134378)设计引物并在上游引物起始密码子前加上Kozak序列(CCACC),提取细粒棘球蚴总RNA,RT-PCR扩增目的基因EG95 cDNA,扩增片段克隆到pcDNA3.1(+)中构建重组载体pcDNA3.1-EG95后测序.重组质粒pcDNA3.1-EG95采用脂质体法转染绵羊胎儿成纤维细胞并用G418筛选,RT-PCR检测稳定转染细胞中目的基因的转录.测序结果表明克隆的目的基因包含了471 bp的完整ORF并与载体连接正确.RT-PCR检测表明EG95基因在稳定转染的绵羊胎儿成纤维细胞中得到转录.成功构建pcDNA3.1-EG95核酸疫苗并可在绵羊胎儿成纤维细胞中转录目的基因,可进一步用于活体动物免疫研究.
剋隆細粒棘毬蚴EG95基因cDNA併構建覈痠疫苗pcDNA3.1-EG95.根據GenBank中細粒棘毬蚴EG95基因序列(AF134378)設計引物併在上遊引物起始密碼子前加上Kozak序列(CCACC),提取細粒棘毬蚴總RNA,RT-PCR擴增目的基因EG95 cDNA,擴增片段剋隆到pcDNA3.1(+)中構建重組載體pcDNA3.1-EG95後測序.重組質粒pcDNA3.1-EG95採用脂質體法轉染綿羊胎兒成纖維細胞併用G418篩選,RT-PCR檢測穩定轉染細胞中目的基因的轉錄.測序結果錶明剋隆的目的基因包含瞭471 bp的完整ORF併與載體連接正確.RT-PCR檢測錶明EG95基因在穩定轉染的綿羊胎兒成纖維細胞中得到轉錄.成功構建pcDNA3.1-EG95覈痠疫苗併可在綿羊胎兒成纖維細胞中轉錄目的基因,可進一步用于活體動物免疫研究.
극륭세립극구유EG95기인cDNA병구건핵산역묘pcDNA3.1-EG95.근거GenBank중세립극구유EG95기인서렬(AF134378)설계인물병재상유인물기시밀마자전가상Kozak서렬(CCACC),제취세립극구유총RNA,RT-PCR확증목적기인EG95 cDNA,확증편단극륭도pcDNA3.1(+)중구건중조재체pcDNA3.1-EG95후측서.중조질립pcDNA3.1-EG95채용지질체법전염면양태인성섬유세포병용G418사선,RT-PCR검측은정전염세포중목적기인적전록.측서결과표명극륭적목적기인포함료471 bp적완정ORF병여재체련접정학.RT-PCR검측표명EG95기인재은정전염적면양태인성섬유세포중득도전록.성공구건pcDNA3.1-EG95핵산역묘병가재면양태인성섬유세포중전록목적기인,가진일보용우활체동물면역연구.
