中国农学通报
中國農學通報
중국농학통보
CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN
2011年
4期
144-147
,共4页
徐品三%白建芳%刘纪文%李焕改
徐品三%白建芳%劉紀文%李煥改
서품삼%백건방%류기문%리환개
百合无症病毒%百合斑驳病毒%RNAi载体%重叠延伸PCR%Gateway技术
百閤無癥病毒%百閤斑駁病毒%RNAi載體%重疊延伸PCR%Gateway技術
백합무증병독%백합반박병독%RNAi재체%중첩연신PCR%Gateway기술
为获得适合转化百合的双价RNAi表达载体,以感病百合叶片的总RNA为模板,分别扩增400bp 左右的LSV和LMoVCP基因.通过重叠延伸PCR技术获得长约800 bp的LSV-LMoV融合基因.利用Gateway技术,通过BP反应及LR反应将LSV-LMoV融合基因克隆到双元载体pH7GWIWG2(Ⅱ),成功构建了含2种病毒基因的RNAi表达载体pH7GWIWG2(Ⅱ)-LSV-LMoV.将构建好的双价表达载体导入农杆菌EHA105,PCR和测序表明所构建的载体及获得的工程菌与预期的完全一致.
為穫得適閤轉化百閤的雙價RNAi錶達載體,以感病百閤葉片的總RNA為模闆,分彆擴增400bp 左右的LSV和LMoVCP基因.通過重疊延伸PCR技術穫得長約800 bp的LSV-LMoV融閤基因.利用Gateway技術,通過BP反應及LR反應將LSV-LMoV融閤基因剋隆到雙元載體pH7GWIWG2(Ⅱ),成功構建瞭含2種病毒基因的RNAi錶達載體pH7GWIWG2(Ⅱ)-LSV-LMoV.將構建好的雙價錶達載體導入農桿菌EHA105,PCR和測序錶明所構建的載體及穫得的工程菌與預期的完全一緻.
위획득괄합전화백합적쌍개RNAi표체재체,이감병백합협편적총RNA위모판,분별확증400bp 좌우적LSV화LMoVCP기인.통과중첩연신PCR기술획득장약800 bp적LSV-LMoV융합기인.이용Gateway기술,통과BP반응급LR반응장LSV-LMoV융합기인극륭도쌍원재체pH7GWIWG2(Ⅱ),성공구건료함2충병독기인적RNAi표체재체pH7GWIWG2(Ⅱ)-LSV-LMoV.장구건호적쌍개표체재체도입농간균EHA105,PCR화측서표명소구건적재체급획득적공정균여예기적완전일치.
