中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2011年
19期
3476-3480
,共5页
刘强%郑瑾%赵星成%尹郸丹%陈任安%刘利%郝淼旺%梁英民
劉彊%鄭瑾%趙星成%尹鄲丹%陳任安%劉利%郝淼旺%樑英民
류강%정근%조성성%윤단단%진임안%류리%학묘왕%량영민
Flt3配体%CD34+%hFLext%Trx-hFLext%载体
Flt3配體%CD34+%hFLext%Trx-hFLext%載體
Flt3배체%CD34+%hFLext%Trx-hFLext%재체
背景:Fms 样酪氨酸激酶3配体(Flt3配体)是一种重要的生长因子,通过激活特定的酪氨酸激酶受体,调控造血细胞的生长、生存和/或分化,具有促进造血干细胞体外扩增的应用潜力.目的:构建pET32a(+)-hFLext原核表达载体,表达、纯化hFLext蛋白,观察其对脐血CD34+细胞的扩增作用.方法:克隆hFLext,构建pET32a(+)-hFLext重组表达载体.转化大肠杆菌 BL21,IPTG诱导蛋白表达,镍珠亲合层析纯化蛋白.磁珠分选脐血CD34+细胞,单独加入hFLext或联合干细胞因子、血小板生成素孵育1周,观察体外扩增作用.结果与结论:成功克隆hFLext,并构建了pET32a(+)-hFLext重组表达载体.在大肠杆菌BL21成功表达Trx-hFLext融合蛋白,经8 mol/L尿素变性包涵体蛋白,逐步透析复性,镍珠亲合层析纯化蛋白,成功获得高纯度的Trx-hFLext融合蛋白.Trx-hFLext融合蛋白不仅具有维持及轻度刺激CD34+细胞体外扩增的作用,并且与干细胞因子及血小板生成素具有协同作用,为造血干/祖细胞体外扩增研究奠定了基础.
揹景:Fms 樣酪氨痠激酶3配體(Flt3配體)是一種重要的生長因子,通過激活特定的酪氨痠激酶受體,調控造血細胞的生長、生存和/或分化,具有促進造血榦細胞體外擴增的應用潛力.目的:構建pET32a(+)-hFLext原覈錶達載體,錶達、純化hFLext蛋白,觀察其對臍血CD34+細胞的擴增作用.方法:剋隆hFLext,構建pET32a(+)-hFLext重組錶達載體.轉化大腸桿菌 BL21,IPTG誘導蛋白錶達,鎳珠親閤層析純化蛋白.磁珠分選臍血CD34+細胞,單獨加入hFLext或聯閤榦細胞因子、血小闆生成素孵育1週,觀察體外擴增作用.結果與結論:成功剋隆hFLext,併構建瞭pET32a(+)-hFLext重組錶達載體.在大腸桿菌BL21成功錶達Trx-hFLext融閤蛋白,經8 mol/L尿素變性包涵體蛋白,逐步透析複性,鎳珠親閤層析純化蛋白,成功穫得高純度的Trx-hFLext融閤蛋白.Trx-hFLext融閤蛋白不僅具有維持及輕度刺激CD34+細胞體外擴增的作用,併且與榦細胞因子及血小闆生成素具有協同作用,為造血榦/祖細胞體外擴增研究奠定瞭基礎.
배경:Fms 양락안산격매3배체(Flt3배체)시일충중요적생장인자,통과격활특정적락안산격매수체,조공조혈세포적생장、생존화/혹분화,구유촉진조혈간세포체외확증적응용잠력.목적:구건pET32a(+)-hFLext원핵표체재체,표체、순화hFLext단백,관찰기대제혈CD34+세포적확증작용.방법:극륭hFLext,구건pET32a(+)-hFLext중조표체재체.전화대장간균 BL21,IPTG유도단백표체,얼주친합층석순화단백.자주분선제혈CD34+세포,단독가입hFLext혹연합간세포인자、혈소판생성소부육1주,관찰체외확증작용.결과여결론:성공극륭hFLext,병구건료pET32a(+)-hFLext중조표체재체.재대장간균BL21성공표체Trx-hFLext융합단백,경8 mol/L뇨소변성포함체단백,축보투석복성,얼주친합층석순화단백,성공획득고순도적Trx-hFLext융합단백.Trx-hFLext융합단백불부구유유지급경도자격CD34+세포체외확증적작용,병차여간세포인자급혈소판생성소구유협동작용,위조혈간/조세포체외확증연구전정료기출.
