遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2012年
4期
495-502
,共8页
阴沟肠杆菌B8%拮抗机理%Andrimid%染色体步移
陰溝腸桿菌B8%拮抗機理%Andrimid%染色體步移
음구장간균B8%길항궤리%Andrimid%염색체보이
为了阐明水稻白叶枯病拮抗菌阴沟肠杆菌B8 的作用机理,文章采用转座子标签法和染色体步移技术克隆到突变株B8B 中Tn5 插入位点周边拮抗活性相关片段,并通过基因敲除验证了获得的拮抗相关片段-admA'上游调控序列的功能.以转座子中Kan 抗性基因为标签,克隆了B8B菌株中Tn5 插入位点左侧2 608 bp 序列,经两次染色体步移得到Tn5 插入位点右侧的2 354 bp 序列.序列拼接后获得B8 菌株拮抗相关序列4 611 bp 的Bcontig.生物信息学分析显示该序列含有7 个ORF,分别对应于3-磷酸甘油醛脱氢酶(GADPH)基因的部分编码区、2 个LysR 家族转录调控因子、弧菌假设蛋白VSWAT3-20465 及成团泛菌(Pantoea agglomerans) andrimid 生物合成基因簇的admA、admB 和部分admC 基因序列.B8B 菌株Tn5 插入分别位于同源于弧菌假设蛋白的anrPORF 及‘admA'基因上游200 bp 和894 bp 处.通过同源重组技术,借助敲除质粒pMB-BG,获得拮抗活性消失的突变株B-1 和B-3.结果表明B8B 突变株中Tn5 的插入可能影响了anrP 蛋白的转录和表达,进而调控拮抗物质编码基因簇的生物合成.B8 菌株中拮抗物质相关基因是类似于andrimid 生物合成基因簇的基因家族,其上游调控区对该抗生素的生物合成具有重要的作用.
為瞭闡明水稻白葉枯病拮抗菌陰溝腸桿菌B8 的作用機理,文章採用轉座子標籤法和染色體步移技術剋隆到突變株B8B 中Tn5 插入位點週邊拮抗活性相關片段,併通過基因敲除驗證瞭穫得的拮抗相關片段-admA'上遊調控序列的功能.以轉座子中Kan 抗性基因為標籤,剋隆瞭B8B菌株中Tn5 插入位點左側2 608 bp 序列,經兩次染色體步移得到Tn5 插入位點右側的2 354 bp 序列.序列拼接後穫得B8 菌株拮抗相關序列4 611 bp 的Bcontig.生物信息學分析顯示該序列含有7 箇ORF,分彆對應于3-燐痠甘油醛脫氫酶(GADPH)基因的部分編碼區、2 箇LysR 傢族轉錄調控因子、弧菌假設蛋白VSWAT3-20465 及成糰汎菌(Pantoea agglomerans) andrimid 生物閤成基因簇的admA、admB 和部分admC 基因序列.B8B 菌株Tn5 插入分彆位于同源于弧菌假設蛋白的anrPORF 及‘admA'基因上遊200 bp 和894 bp 處.通過同源重組技術,藉助敲除質粒pMB-BG,穫得拮抗活性消失的突變株B-1 和B-3.結果錶明B8B 突變株中Tn5 的插入可能影響瞭anrP 蛋白的轉錄和錶達,進而調控拮抗物質編碼基因簇的生物閤成.B8 菌株中拮抗物質相關基因是類似于andrimid 生物閤成基因簇的基因傢族,其上遊調控區對該抗生素的生物閤成具有重要的作用.
위료천명수도백협고병길항균음구장간균B8 적작용궤리,문장채용전좌자표첨법화염색체보이기술극륭도돌변주B8B 중Tn5 삽입위점주변길항활성상관편단,병통과기인고제험증료획득적길항상관편단-admA'상유조공서렬적공능.이전좌자중Kan 항성기인위표첨,극륭료B8B균주중Tn5 삽입위점좌측2 608 bp 서렬,경량차염색체보이득도Tn5 삽입위점우측적2 354 bp 서렬.서렬병접후획득B8 균주길항상관서렬4 611 bp 적Bcontig.생물신식학분석현시해서렬함유7 개ORF,분별대응우3-린산감유철탈경매(GADPH)기인적부분편마구、2 개LysR 가족전록조공인자、호균가설단백VSWAT3-20465 급성단범균(Pantoea agglomerans) andrimid 생물합성기인족적admA、admB 화부분admC 기인서렬.B8B 균주Tn5 삽입분별위우동원우호균가설단백적anrPORF 급‘admA'기인상유200 bp 화894 bp 처.통과동원중조기술,차조고제질립pMB-BG,획득길항활성소실적돌변주B-1 화B-3.결과표명B8B 돌변주중Tn5 적삽입가능영향료anrP 단백적전록화표체,진이조공길항물질편마기인족적생물합성.B8 균주중길항물질상관기인시유사우andrimid 생물합성기인족적기인가족,기상유조공구대해항생소적생물합성구유중요적작용.
