暨南大学学报（自然科学与医学版）
暨南大學學報（自然科學與醫學版）
기남대학학보（자연과학여의학판）
JOURNAL OF JINAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE & MEDICINE EDITION）
2012年
5期
496-500
,共5页
黄曲霉毒素氧化酶%等温滴定微量热技术%酶动力学
黃麯黴毒素氧化酶%等溫滴定微量熱技術%酶動力學
황곡매독소양화매%등온적정미량열기술%매동역학
黄曲霉毒素氧化酶(AFO)是来自Armillariella tabescens的具有降解黄曲霉毒素作用的蛋白质酶.本实验室成功克隆和以原核系统表达了黄曲霉毒素氧化酶,前期的工作中用传统测量表观酶促反应速度的方法对AFO进行了酶动力学的研究,采用了在酶反应的结束点进行分析,因此不能够连续监测酶的反应过程,且实验过程较为繁琐,影响因素较多,对动力学常数的测量存在不够准确的可能.本实验使用等温滴定微量热技术对该酶的酶促动力学进行研究,该方法通过酶与底物的滴定实验直接监测酶反应过程中的热量变化而对酶动力学进行分析,滴定产生一个完整的Michaelis-Menten曲线,通过拟合分析测得黄曲霉毒素氧化酶对AFB1催化的米氏常数KmAFB1=3.34×10-7 mol/L;酶催化ST反应的米氏常数KmST=1.06×10-7 mol/L.对AFB1和ST酶转换系数别为KcatAFB1=2.7 min-1和KcatST=1.7 min-1.结合函分别为△HAFB1=-1.686×107 J/mol,△HST=-9.092×106 J/mol.与传统方法相比,ITC方法在酶动力学研究上具有简便、快速和准确的优点并具有普适性.
黃麯黴毒素氧化酶(AFO)是來自Armillariella tabescens的具有降解黃麯黴毒素作用的蛋白質酶.本實驗室成功剋隆和以原覈繫統錶達瞭黃麯黴毒素氧化酶,前期的工作中用傳統測量錶觀酶促反應速度的方法對AFO進行瞭酶動力學的研究,採用瞭在酶反應的結束點進行分析,因此不能夠連續鑑測酶的反應過程,且實驗過程較為繁瑣,影響因素較多,對動力學常數的測量存在不夠準確的可能.本實驗使用等溫滴定微量熱技術對該酶的酶促動力學進行研究,該方法通過酶與底物的滴定實驗直接鑑測酶反應過程中的熱量變化而對酶動力學進行分析,滴定產生一箇完整的Michaelis-Menten麯線,通過擬閤分析測得黃麯黴毒素氧化酶對AFB1催化的米氏常數KmAFB1=3.34×10-7 mol/L;酶催化ST反應的米氏常數KmST=1.06×10-7 mol/L.對AFB1和ST酶轉換繫數彆為KcatAFB1=2.7 min-1和KcatST=1.7 min-1.結閤函分彆為△HAFB1=-1.686×107 J/mol,△HST=-9.092×106 J/mol.與傳統方法相比,ITC方法在酶動力學研究上具有簡便、快速和準確的優點併具有普適性.
황곡매독소양화매(AFO)시래자Armillariella tabescens적구유강해황곡매독소작용적단백질매.본실험실성공극륭화이원핵계통표체료황곡매독소양화매,전기적공작중용전통측량표관매촉반응속도적방법대AFO진행료매동역학적연구,채용료재매반응적결속점진행분석,인차불능구련속감측매적반응과정,차실험과정교위번쇄,영향인소교다,대동역학상수적측량존재불구준학적가능.본실험사용등온적정미량열기술대해매적매촉동역학진행연구,해방법통과매여저물적적정실험직접감측매반응과정중적열량변화이대매동역학진행분석,적정산생일개완정적Michaelis-Menten곡선,통과의합분석측득황곡매독소양화매대AFB1최화적미씨상수KmAFB1=3.34×10-7 mol/L;매최화ST반응적미씨상수KmST=1.06×10-7 mol/L.대AFB1화ST매전환계수별위KcatAFB1=2.7 min-1화KcatST=1.7 min-1.결합함분별위△HAFB1=-1.686×107 J/mol,△HST=-9.092×106 J/mol.여전통방법상비,ITC방법재매동역학연구상구유간편、쾌속화준학적우점병구유보괄성.
