CAJ | 학술논문

目的:研究DNA低甲基化对穿孔素基因mRNA和蛋白表达的影响.方法:密度梯度离心分离正常成人的外周血淋巴细胞,磁珠分离CD4和CD8细胞后进行细胞培养,DNA甲基化抑制剂5-杂氮胞苷(5-azaC)处理.分别提取DNA、RNA和蛋白质.亚硫酸氢钠处理DNA,巢式PCR进行扩增、转化入大肠杆菌,挑取克隆测序.实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测穿孔素mRNA的表达,Western印迹检测穿孔素蛋白量的变化.结果:5-azaC处理后的CD4细胞和CD8细胞穿孔素mRNA和蛋白表达显著高于未处理的CD4和CD8细胞组(P＜0.05).测序结果显示5-azaC处理后的CD4细胞和CD8细胞DNA穿孔素启动子区域的甲基化水平降低,与未处理的CD4和CD8细胞组比较差异有统计学意义(P＜0-05).结论:5-azaC处理后CD4和CD8细胞穿孔素mRNA的表达和蛋白的表达都有显著的增高,这种增高与CD4和CD8细胞穿孔素基因启动子区域出现的低甲基化有关.
목적:연구DNA저갑기화대천공소기인mRNA화단백표체적영향.방법:밀도제도리심분리정상성인적외주혈림파세포,자주분리CD4화CD8세포후진행세포배양,DNA갑기화억제제5-잡담포감(5-azaC)처리.분별제취DNA、RNA화단백질.아류산경납처리DNA,소식PCR진행확증、전화입대장간균,도취극륭측서.실시정량역전록취합매련반응(RT-PCR)검측천공소mRNA적표체,Western인적검측천공소단백량적변화.결과:5-azaC처리후적CD4세포화CD8세포천공소mRNA화단백표체현저고우미처리적CD4화CD8세포조(P＜0.05).측서결과현시5-azaC처리후적CD4세포화CD8세포DNA천공소계동자구역적갑기화수평강저,여미처리적CD4화CD8세포조비교차이유통계학의의(P＜0-05).결론:5-azaC처리후CD4화CD8세포천공소mRNA적표체화단백적표체도유현저적증고,저충증고여CD4화CD8세포천공소기인계동자구역출현적저갑기화유관.