免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2008年
3期
251-253,258
,共4页
汤玉瑜%陈永文%郭晟%吴玉章
湯玉瑜%陳永文%郭晟%吳玉章
탕옥유%진영문%곽성%오옥장
HBV%真核表达载体%稳定转染的HepG2细胞系%基因表达
HBV%真覈錶達載體%穩定轉染的HepG2細胞繫%基因錶達
HBV%진핵표체재체%은정전염적HepG2세포계%기인표체
目的 构建HBV基因组各基因真核表达载体,转染HepG2细胞,建立稳定转染的HepG2细胞系.方法 采用PCR方法,以HBV全基因组质粒为模板扩增HBV基因的各基因片段,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染HepG2细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的HepG2细胞系,用细胞流式技术及细胞免疫组化技术检测HBV各基因产物在细胞内的表达.结果 成功构建了pcDNA3.1(+)/HBs、pcDNA3.1(+)/HBc、pcDNA3.1(+)/HBe、pcDNA3.1(+)/HBp、pcDNA3.1(+)/HB-preS1、pcDNA3.1(+)/HB-preS2、pcDNA3.1(+)/HBx真核表达载体,并建立了稳定转染的HepG2细胞系,成功地表达目的 基因.结论 真核表达载体成功构建和稳定转染HepG2细胞系的建立为进一步研究各基因的功能奠定良好的实验基础.
目的 構建HBV基因組各基因真覈錶達載體,轉染HepG2細胞,建立穩定轉染的HepG2細胞繫.方法 採用PCR方法,以HBV全基因組質粒為模闆擴增HBV基因的各基因片段,利用DNA重組技術將其定嚮插入到真覈錶達載體pcDNA3.1(+),經酶切和測序鑒定後,用脂質體轉染法轉染HepG2細胞,通過G418篩選,建立穩定轉染的HepG2細胞繫,用細胞流式技術及細胞免疫組化技術檢測HBV各基因產物在細胞內的錶達.結果 成功構建瞭pcDNA3.1(+)/HBs、pcDNA3.1(+)/HBc、pcDNA3.1(+)/HBe、pcDNA3.1(+)/HBp、pcDNA3.1(+)/HB-preS1、pcDNA3.1(+)/HB-preS2、pcDNA3.1(+)/HBx真覈錶達載體,併建立瞭穩定轉染的HepG2細胞繫,成功地錶達目的 基因.結論 真覈錶達載體成功構建和穩定轉染HepG2細胞繫的建立為進一步研究各基因的功能奠定良好的實驗基礎.
목적 구건HBV기인조각기인진핵표체재체,전염HepG2세포,건립은정전염적HepG2세포계.방법 채용PCR방법,이HBV전기인조질립위모판확증HBV기인적각기인편단,이용DNA중조기술장기정향삽입도진핵표체재체pcDNA3.1(+),경매절화측서감정후,용지질체전염법전염HepG2세포,통과G418사선,건립은정전염적HepG2세포계,용세포류식기술급세포면역조화기술검측HBV각기인산물재세포내적표체.결과 성공구건료pcDNA3.1(+)/HBs、pcDNA3.1(+)/HBc、pcDNA3.1(+)/HBe、pcDNA3.1(+)/HBp、pcDNA3.1(+)/HB-preS1、pcDNA3.1(+)/HB-preS2、pcDNA3.1(+)/HBx진핵표체재체,병건립료은정전염적HepG2세포계,성공지표체목적 기인.결론 진핵표체재체성공구건화은정전염HepG2세포계적건립위진일보연구각기인적공능전정량호적실험기출.
