中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2010年
3期
749-752
,共4页
聂欣%杨林花%柴宝峰%申泉%张媛%张耀方%陈剑芳
聶訢%楊林花%柴寶峰%申泉%張媛%張耀方%陳劍芳
섭흔%양림화%시보봉%신천%장원%장요방%진검방
凝血因子Ⅸ%真核表达载体%血友病B%提前终止翻译密码子
凝血因子Ⅸ%真覈錶達載體%血友病B%提前終止翻譯密碼子
응혈인자Ⅸ%진핵표체재체%혈우병B%제전종지번역밀마자
本研究以含有fⅨcDNA的pcDNA3.1质粒为模板构建4种包含不同类型无义突变的fⅨ真核表达载体并进行鉴定,实现其在COS-7细胞中的表达.采用以PCR为基础的定点突变法体外构建fⅨ基因无义突变体,并通过DNA序列分析进一步鉴定证实;应用脂质体转化技术将野生型、突变型fⅨ表达载体分别瞬时转染COS-7细胞,采用实时定量PCR鉴定fⅨmRNA在各组的相对表达水平.结果表明,4个突变型质粒除相应位点的无义突变外,未见其它突变,提示无义突变载体构建成功.实时定量PCR鉴定表明,各突变组真核表达载体已成功转染COS-7细胞株并能转录为mRNA.结论:采用以PCR为基础的定点突变法可在体外构建fⅨ真核表达载体,并可在COS-7细胞中表达,其转录过程中不引发mRNA降解,这为进一步研究无义突变引起FⅨ功能丧失及表达量降低的机制和治疗研究提供了物质基础.
本研究以含有fⅨcDNA的pcDNA3.1質粒為模闆構建4種包含不同類型無義突變的fⅨ真覈錶達載體併進行鑒定,實現其在COS-7細胞中的錶達.採用以PCR為基礎的定點突變法體外構建fⅨ基因無義突變體,併通過DNA序列分析進一步鑒定證實;應用脂質體轉化技術將野生型、突變型fⅨ錶達載體分彆瞬時轉染COS-7細胞,採用實時定量PCR鑒定fⅨmRNA在各組的相對錶達水平.結果錶明,4箇突變型質粒除相應位點的無義突變外,未見其它突變,提示無義突變載體構建成功.實時定量PCR鑒定錶明,各突變組真覈錶達載體已成功轉染COS-7細胞株併能轉錄為mRNA.結論:採用以PCR為基礎的定點突變法可在體外構建fⅨ真覈錶達載體,併可在COS-7細胞中錶達,其轉錄過程中不引髮mRNA降解,這為進一步研究無義突變引起FⅨ功能喪失及錶達量降低的機製和治療研究提供瞭物質基礎.
본연구이함유fⅨcDNA적pcDNA3.1질립위모판구건4충포함불동류형무의돌변적fⅨ진핵표체재체병진행감정,실현기재COS-7세포중적표체.채용이PCR위기출적정점돌변법체외구건fⅨ기인무의돌변체,병통과DNA서렬분석진일보감정증실;응용지질체전화기술장야생형、돌변형fⅨ표체재체분별순시전염COS-7세포,채용실시정량PCR감정fⅨmRNA재각조적상대표체수평.결과표명,4개돌변형질립제상응위점적무의돌변외,미견기타돌변,제시무의돌변재체구건성공.실시정량PCR감정표명,각돌변조진핵표체재체이성공전염COS-7세포주병능전록위mRNA.결론:채용이PCR위기출적정점돌변법가재체외구건fⅨ진핵표체재체,병가재COS-7세포중표체,기전록과정중불인발mRNA강해,저위진일보연구무의돌변인기FⅨ공능상실급표체량강저적궤제화치료연구제공료물질기출.
