CAJ | 학술논문

目的研究免疫磁珠两步法体外分离纯化小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的效果.方法将C57BL/6(H-2b)小鼠脾脏剪碎、过滤、去除红细胞后离心洗涤,获得小鼠脾细胞悬液.用Ficoll法分离获得单个核细胞后,通过免疫磁珠阴性加阳性选择两步法分离获得CD4+CD25+Treg和CD4+CD25-Treg.用流式细胞仪检测所获得CD4+CD25+Treg的纯度,并比较纯化分离前后脾脏CD4+CD25+Treg的比例,用台盼蓝染色后计算CD4+CD25+Treg的细胞存活率,并对分离后的细胞表型进行鉴定.结果免疫磁珠阴性加阳性选择两步法纯化分离后CD4+CD25+Treg的纯度为(88.7±2.9)%,分离前CD4+CD25+Treg的平均比例为11.6 %,纯化分离后CD4+CD25+Treg的平均比例为93.7 %.细胞存活率为(93.7±4.1)%.与CD4+CD25-Treg相比,CD4+CD25+Treg的CD44表达略有增加(P>0.05),CD45RB的表达明显下降(P＜0.05),CTLA- 4和Foxp3的表达明显增加(均为P＜0.05).结论使用免疫磁珠两步法分离纯化,能避免激惹CD4分子,可获得高纯度且具有天然CD4+CD25+Treg表型的细胞.
목적 연구면역자주량보법체외분리순화소서비장CD4+CD25+조절성T세포(regulatory T cells,Treg)적효과.방법 장C57BL/6(H-2b)소서비장전쇄、과려、거제홍세포후리심세조,획득소서비세포현액.용Ficoll법분리획득단개핵세포후,통과면역자주음성가양성선택량보법분리획득CD4+CD25+Treg화CD4+CD25-Treg.용류식세포의검측소획득CD4+CD25+Treg적순도,병비교순화분리전후비장CD4+CD25+Treg적비례,용태반람염색후계산CD4+CD25+Treg적세포존활솔,병대분리후적세포표형진행감정.결과 면역자주음성가양성선택량보법순화분리후CD4+CD25+Treg적순도위(88.7±2.9)%,분리전CD4+CD25+Treg적평균비례위11.6 %,순화분리후CD4+CD25+Treg적평균비례위93.7 %.세포존활솔위(93.7±4.1)%.여CD4+CD25-Treg상비,CD4+CD25+Treg적CD44표체략유증가(P>0.05),CD45RB적표체명현하강(P＜0.05),CTLA- 4화Foxp3적표체명현증가(균위P＜0.05).결론 사용면역자주량보법분리순화,능피면격야CD4분자,가획득고순도차구유천연CD4+CD25+Treg표형적세포.