军事医学
軍事醫學
군사의학
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2012年
1期
40-43
,共4页
张乐之%张彦%李德彬%叶丙雨%肖丽霞%赵玉军%赵志虎
張樂之%張彥%李德彬%葉丙雨%肖麗霞%趙玉軍%趙誌虎
장악지%장언%리덕빈%협병우%초려하%조옥군%조지호
miR-139%真核表达载体%qRT-PCR%ZR75-1%癌基因
miR-139%真覈錶達載體%qRT-PCR%ZR75-1%癌基因
miR-139%진핵표체재체%qRT-PCR%ZR75-1%암기인
目的 构建人miR-139高效真核表达载体,初步探究miR-139在乳腺癌ZR75-1细胞中的功能.方法 设计成熟miR-139的PCR引物,扩增包含miR-139成熟序列的基因组序列.将扩增产物亚克隆到真核表达载体PIRES2-EGFP(IE)上,构建miR-139真核表达载体IE-139.将IE-139转染至乳腺癌ZR75-1细胞中,通过实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-139的表达情况,同时检测过表达miR-139的乳腺癌ZR75-1细胞中癌基因c-Myc、EIF4G2和ZBTB34的mRNA水平.结果 酶切、测序结果表明,人miR-139真核表达载体构建成功;qRT-PCR表明,miR-139能在乳腺癌ZR75-1细胞中高效表达(P<0.01),过表达miR-139的乳腺癌ZR75-1细胞中c-Myc和EIF4G2的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),但ZBTB34的下降水平不明显.结论 成功构建了人miR-139真核表达载体IE-139,通过qRT-PCR检测,证明该载体能成功实现miR-139的高效过表达,并且miR-139能明显抑制乳腺癌ZR75-1细胞中癌基因c-Myc和EIF4G2的mRNA表达水平,这为进一步研究miR-139的功能及调控靶基因的分子机制奠定了基础.
目的 構建人miR-139高效真覈錶達載體,初步探究miR-139在乳腺癌ZR75-1細胞中的功能.方法 設計成熟miR-139的PCR引物,擴增包含miR-139成熟序列的基因組序列.將擴增產物亞剋隆到真覈錶達載體PIRES2-EGFP(IE)上,構建miR-139真覈錶達載體IE-139.將IE-139轉染至乳腺癌ZR75-1細胞中,通過實時定量PCR(qRT-PCR)檢測miR-139的錶達情況,同時檢測過錶達miR-139的乳腺癌ZR75-1細胞中癌基因c-Myc、EIF4G2和ZBTB34的mRNA水平.結果 酶切、測序結果錶明,人miR-139真覈錶達載體構建成功;qRT-PCR錶明,miR-139能在乳腺癌ZR75-1細胞中高效錶達(P<0.01),過錶達miR-139的乳腺癌ZR75-1細胞中c-Myc和EIF4G2的mRNA錶達水平顯著降低(P<0.05),但ZBTB34的下降水平不明顯.結論 成功構建瞭人miR-139真覈錶達載體IE-139,通過qRT-PCR檢測,證明該載體能成功實現miR-139的高效過錶達,併且miR-139能明顯抑製乳腺癌ZR75-1細胞中癌基因c-Myc和EIF4G2的mRNA錶達水平,這為進一步研究miR-139的功能及調控靶基因的分子機製奠定瞭基礎.
목적 구건인miR-139고효진핵표체재체,초보탐구miR-139재유선암ZR75-1세포중적공능.방법 설계성숙miR-139적PCR인물,확증포함miR-139성숙서렬적기인조서렬.장확증산물아극륭도진핵표체재체PIRES2-EGFP(IE)상,구건miR-139진핵표체재체IE-139.장IE-139전염지유선암ZR75-1세포중,통과실시정량PCR(qRT-PCR)검측miR-139적표체정황,동시검측과표체miR-139적유선암ZR75-1세포중암기인c-Myc、EIF4G2화ZBTB34적mRNA수평.결과 매절、측서결과표명,인miR-139진핵표체재체구건성공;qRT-PCR표명,miR-139능재유선암ZR75-1세포중고효표체(P<0.01),과표체miR-139적유선암ZR75-1세포중c-Myc화EIF4G2적mRNA표체수평현저강저(P<0.05),단ZBTB34적하강수평불명현.결론 성공구건료인miR-139진핵표체재체IE-139,통과qRT-PCR검측,증명해재체능성공실현miR-139적고효과표체,병차miR-139능명현억제유선암ZR75-1세포중암기인c-Myc화EIF4G2적mRNA표체수평,저위진일보연구miR-139적공능급조공파기인적분자궤제전정료기출.
