中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2011年
10期
76-81
,共6页
梁艺瑜%冯少珍%史伟伟%刘红波%王小芬%李育豪%廖明%曹伟胜
樑藝瑜%馮少珍%史偉偉%劉紅波%王小芬%李育豪%廖明%曹偉勝
량예유%풍소진%사위위%류홍파%왕소분%리육호%료명%조위성
J亚群禽白血病病毒%单因子血清%g p85基因%蛋白表达
J亞群禽白血病病毒%單因子血清%g p85基因%蛋白錶達
J아군금백혈병병독%단인자혈청%g p85기인%단백표체
J亚群禽白血病病毒(ALV-J)在中国普遍存在,严重危害养禽业,暂时尚无有效预防、治疗禽白血病的措施,只能通过净化控制.因此,研究一种低成本、易推广的检测方法对防控此病非常重要.用DF-1细胞接种病毒,以细胞基因组为模板,通过巢式PCR方法扩增出941 bp的含酶切位点的ALV-J特异性基因gp85基因序列,连接于pET32a(+)载体上,实现gp85蛋白在宿主菌BL21的表达,以切胶回收方式纯化蛋白,成功获得约52 ku的重组融合蛋白,免疫新西兰兔,制备gp85单因子抗血清,Dot-ELISA检测抗体效价.结果显示,纯化所得蛋白质具有良好抗原性,制备的抗血清效价高于1.024×105.本试验通过较简便、低耗的方法获得高效单因子血清,为抗血清的制备提供参考,为ALV-J gp85蛋白的研究、ALV-J特异性检测方法的研制打下基础,对ALV-J的净化有重要意义.
J亞群禽白血病病毒(ALV-J)在中國普遍存在,嚴重危害養禽業,暫時尚無有效預防、治療禽白血病的措施,隻能通過淨化控製.因此,研究一種低成本、易推廣的檢測方法對防控此病非常重要.用DF-1細胞接種病毒,以細胞基因組為模闆,通過巢式PCR方法擴增齣941 bp的含酶切位點的ALV-J特異性基因gp85基因序列,連接于pET32a(+)載體上,實現gp85蛋白在宿主菌BL21的錶達,以切膠迴收方式純化蛋白,成功穫得約52 ku的重組融閤蛋白,免疫新西蘭兔,製備gp85單因子抗血清,Dot-ELISA檢測抗體效價.結果顯示,純化所得蛋白質具有良好抗原性,製備的抗血清效價高于1.024×105.本試驗通過較簡便、低耗的方法穫得高效單因子血清,為抗血清的製備提供參攷,為ALV-J gp85蛋白的研究、ALV-J特異性檢測方法的研製打下基礎,對ALV-J的淨化有重要意義.
J아군금백혈병병독(ALV-J)재중국보편존재,엄중위해양금업,잠시상무유효예방、치료금백혈병적조시,지능통과정화공제.인차,연구일충저성본、역추엄적검측방법대방공차병비상중요.용DF-1세포접충병독,이세포기인조위모판,통과소식PCR방법확증출941 bp적함매절위점적ALV-J특이성기인gp85기인서렬,련접우pET32a(+)재체상,실현gp85단백재숙주균BL21적표체,이절효회수방식순화단백,성공획득약52 ku적중조융합단백,면역신서란토,제비gp85단인자항혈청,Dot-ELISA검측항체효개.결과현시,순화소득단백질구유량호항원성,제비적항혈청효개고우1.024×105.본시험통과교간편、저모적방법획득고효단인자혈청,위항혈청적제비제공삼고,위ALV-J gp85단백적연구、ALV-J특이성검측방법적연제타하기출,대ALV-J적정화유중요의의.
