华中农业大学学报
華中農業大學學報
화중농업대학학보
JOURNAL OF HUAZHONG AGRICULTURAL UNIVERSITY
2012年
2期
220-226
,共7页
李林%梁宏伟%李忠%罗相忠%张志伟%朱媛媛%邹桂伟
李林%樑宏偉%李忠%囉相忠%張誌偉%硃媛媛%鄒桂偉
리림%량굉위%리충%라상충%장지위%주원원%추계위
黄颡鱼%DMRT1基因%cDNA末端快速扩增(RACE)%基因克隆%荧光定量%表达分析
黃顙魚%DMRT1基因%cDNA末耑快速擴增(RACE)%基因剋隆%熒光定量%錶達分析
황상어%DMRT1기인%cDNA말단쾌속확증(RACE)%기인극륭%형광정량%표체분석
利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)克隆了黄颡鱼DMRT1基因cDNA全长序列,并利用实时荧光定量RT-PCR技术对该基因在黄颡鱼成体不同组织及不同发育阶段的表达情况进行研究.结果表明,黄颡鱼DMRT1基因cDNA序列全长1 381 bp,其中5'端非翻译区30bp,3'端非翻译区454 bp[不包括poly(A)],开放阅读框885 bp,编码295个氨基酸.氨基酸序列同源性分析表明,黄颡鱼DMRT1基因与革胡子鲶同源性最高(为81％),与黑鲷、虹鳟、斑马鱼、青鳉的同源性分别为60％、59％、64％和52％,与小鼠、人的同源性较低,分别为42％和44％.实时荧光定量RT-PCR分析表明:DMRT1基因在黄颡鱼胚胎发育阶段及胚后发育的1～51 d仔鱼均有表达,且在胚后发育的第31天表达量最高；在成体,只在雄性精巢中特异性表达,其他组织均无表达,且性腺发育阶段的Ⅳ期精巢表达量最高,表明该基因可能在黄颡鱼雄性性腺的形成或功能维持上具有重要作用.
利用RT-PCR和cDNA末耑快速擴增技術(rapid amplification of cDNA ends,RACE)剋隆瞭黃顙魚DMRT1基因cDNA全長序列,併利用實時熒光定量RT-PCR技術對該基因在黃顙魚成體不同組織及不同髮育階段的錶達情況進行研究.結果錶明,黃顙魚DMRT1基因cDNA序列全長1 381 bp,其中5'耑非翻譯區30bp,3'耑非翻譯區454 bp[不包括poly(A)],開放閱讀框885 bp,編碼295箇氨基痠.氨基痠序列同源性分析錶明,黃顙魚DMRT1基因與革鬍子鯰同源性最高(為81％),與黑鯛、虹鱒、斑馬魚、青鳉的同源性分彆為60％、59％、64％和52％,與小鼠、人的同源性較低,分彆為42％和44％.實時熒光定量RT-PCR分析錶明:DMRT1基因在黃顙魚胚胎髮育階段及胚後髮育的1～51 d仔魚均有錶達,且在胚後髮育的第31天錶達量最高；在成體,隻在雄性精巢中特異性錶達,其他組織均無錶達,且性腺髮育階段的Ⅳ期精巢錶達量最高,錶明該基因可能在黃顙魚雄性性腺的形成或功能維持上具有重要作用.
이용RT-PCR화cDNA말단쾌속확증기술(rapid amplification of cDNA ends,RACE)극륭료황상어DMRT1기인cDNA전장서렬,병이용실시형광정량RT-PCR기술대해기인재황상어성체불동조직급불동발육계단적표체정황진행연구.결과표명,황상어DMRT1기인cDNA서렬전장1 381 bp,기중5'단비번역구30bp,3'단비번역구454 bp[불포괄poly(A)],개방열독광885 bp,편마295개안기산.안기산서렬동원성분석표명,황상어DMRT1기인여혁호자염동원성최고(위81％),여흑조、홍준、반마어、청장적동원성분별위60％、59％、64％화52％,여소서、인적동원성교저,분별위42％화44％.실시형광정량RT-PCR분석표명:DMRT1기인재황상어배태발육계단급배후발육적1～51 d자어균유표체,차재배후발육적제31천표체량최고；재성체,지재웅성정소중특이성표체,기타조직균무표체,차성선발육계단적Ⅳ기정소표체량최고,표명해기인가능재황상어웅성성선적형성혹공능유지상구유중요작용.
