眼科研究
眼科研究
안과연구
CHINESE OPHTHALMIC RESEARCH
2010年
5期
401-405
,共5页
石燕红%薛铮%朱彤%马丽娜%胡丹%崔志利
石燕紅%薛錚%硃彤%馬麗娜%鬍丹%崔誌利
석연홍%설쟁%주동%마려나%호단%최지리
癌钙调蛋白%鱼精蛋白%融合基因%原核表达
癌鈣調蛋白%魚精蛋白%融閤基因%原覈錶達
암개조단백%어정단백%융합기인%원핵표체
目的 在原核表达载体中构建癌钙调蛋白(OM)/鱼精蛋白截短体(tp)融合基因,进行基因测序鉴定.方法 提取SD大鼠腹腔巨噬细胞,并进行细胞计数,经巨噬细胞特异性抗体CD68鉴定.设计引物扩增OM基因,并在其3'端引入tp的编码基因,经PCR扩增获得OM/tp融合基因,通过中间载体PUC57进行目的基因克隆,将阳性克隆质粒酶切,与原核表达载体PET32a连接,转化大肠杆菌感受态细胞,筛选阳性克隆,小量提取质粒,送样经公司测序鉴定.结果 琼脂糖凝胶电泳获得OM/tp目的基因,与预期的目的基因大小一致,回收目的基因与中间载体PUC57连接转化大肠杆菌感受态细胞DH5α后,菌检PCR获得约500bp的阳性克隆,与预期大小一致.抽提质粒PUC57-OM/tp,经测序鉴定后与预期的序列一致.质粒PUC57-OM/tp酶切后与载体PET32a连接转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,菌检PCR获得约500 bp的阳性克隆,与预期大小一致.抽提质粒PET32a-OM/tp经测序后与预期的序列一致.结论 OM/tp融合基因的成功构建,为该融合蛋白促进视神经损伤后再生的研究奠定了基础.
目的 在原覈錶達載體中構建癌鈣調蛋白(OM)/魚精蛋白截短體(tp)融閤基因,進行基因測序鑒定.方法 提取SD大鼠腹腔巨噬細胞,併進行細胞計數,經巨噬細胞特異性抗體CD68鑒定.設計引物擴增OM基因,併在其3'耑引入tp的編碼基因,經PCR擴增穫得OM/tp融閤基因,通過中間載體PUC57進行目的基因剋隆,將暘性剋隆質粒酶切,與原覈錶達載體PET32a連接,轉化大腸桿菌感受態細胞,篩選暘性剋隆,小量提取質粒,送樣經公司測序鑒定.結果 瓊脂糖凝膠電泳穫得OM/tp目的基因,與預期的目的基因大小一緻,迴收目的基因與中間載體PUC57連接轉化大腸桿菌感受態細胞DH5α後,菌檢PCR穫得約500bp的暘性剋隆,與預期大小一緻.抽提質粒PUC57-OM/tp,經測序鑒定後與預期的序列一緻.質粒PUC57-OM/tp酶切後與載體PET32a連接轉化大腸桿菌感受態細胞DH5α,菌檢PCR穫得約500 bp的暘性剋隆,與預期大小一緻.抽提質粒PET32a-OM/tp經測序後與預期的序列一緻.結論 OM/tp融閤基因的成功構建,為該融閤蛋白促進視神經損傷後再生的研究奠定瞭基礎.
목적 재원핵표체재체중구건암개조단백(OM)/어정단백절단체(tp)융합기인,진행기인측서감정.방법 제취SD대서복강거서세포,병진행세포계수,경거서세포특이성항체CD68감정.설계인물확증OM기인,병재기3'단인입tp적편마기인,경PCR확증획득OM/tp융합기인,통과중간재체PUC57진행목적기인극륭,장양성극륭질립매절,여원핵표체재체PET32a련접,전화대장간균감수태세포,사선양성극륭,소량제취질립,송양경공사측서감정.결과 경지당응효전영획득OM/tp목적기인,여예기적목적기인대소일치,회수목적기인여중간재체PUC57련접전화대장간균감수태세포DH5α후,균검PCR획득약500bp적양성극륭,여예기대소일치.추제질립PUC57-OM/tp,경측서감정후여예기적서렬일치.질립PUC57-OM/tp매절후여재체PET32a련접전화대장간균감수태세포DH5α,균검PCR획득약500 bp적양성극륭,여예기대소일치.추제질립PET32a-OM/tp경측서후여예기적서렬일치.결론 OM/tp융합기인적성공구건,위해융합단백촉진시신경손상후재생적연구전정료기출.
