中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2004年
10期
785-789
,共5页
李建民%陈薇%安小平%李冰%樊英茹%郝晓萌%左少军%童贻刚
李建民%陳薇%安小平%李冰%樊英茹%郝曉萌%左少軍%童貽剛
리건민%진미%안소평%리빙%번영여%학효맹%좌소군%동이강
基孔肯亚病毒%双启动子表达载体%人-鼠嵌合抗体%CHO细胞
基孔肯亞病毒%雙啟動子錶達載體%人-鼠嵌閤抗體%CHO細胞
기공긍아병독%쌍계동자표체재체%인-서감합항체%CHO세포
目的在CHO细胞中表达基孔肯亚病毒人-鼠嵌合抗体,并对其活性进行分析. 方法以质粒pcDNA5/FRT为骨架,应用pCI-dhfr1(本室构建并保存)的dhfr基因和hCMV启动子及SV40 polyA,构建了含有共扩增基因的哺乳动物双启动子表达载体,RT-PCR克隆具有中和活性鼠源单克隆抗体的轻重链可变区基因,与人IgG1轻重链恒定区基因融合后亚克隆到表达载体pA的多克隆位点,构建了表达质粒pA-HL, 脂质体转染CHO(dhfr-)细胞,撤掉胸腺嘧啶和次黄嘌呤并不断提高MTX的浓度,筛选表达量高的克隆,扩大培养、收集上清,并纯化,纯化的嵌合抗体进行SDS-PAGE、Western 印迹、抗原结合活性和微量细胞中和实验. 结果在MTX的浓度为2×10-7mol/L时,获得稳定表达细胞株,表达量为5mg/L. 结论成功地在CHO(dhfr-)细胞表达了具有中和活性的基孔肯亚病毒人-鼠嵌合抗体,为制备抗基孔肯亚病的被动免疫制剂奠定了良好的基础.
目的在CHO細胞中錶達基孔肯亞病毒人-鼠嵌閤抗體,併對其活性進行分析. 方法以質粒pcDNA5/FRT為骨架,應用pCI-dhfr1(本室構建併保存)的dhfr基因和hCMV啟動子及SV40 polyA,構建瞭含有共擴增基因的哺乳動物雙啟動子錶達載體,RT-PCR剋隆具有中和活性鼠源單剋隆抗體的輕重鏈可變區基因,與人IgG1輕重鏈恆定區基因融閤後亞剋隆到錶達載體pA的多剋隆位點,構建瞭錶達質粒pA-HL, 脂質體轉染CHO(dhfr-)細胞,撤掉胸腺嘧啶和次黃嘌呤併不斷提高MTX的濃度,篩選錶達量高的剋隆,擴大培養、收集上清,併純化,純化的嵌閤抗體進行SDS-PAGE、Western 印跡、抗原結閤活性和微量細胞中和實驗. 結果在MTX的濃度為2×10-7mol/L時,穫得穩定錶達細胞株,錶達量為5mg/L. 結論成功地在CHO(dhfr-)細胞錶達瞭具有中和活性的基孔肯亞病毒人-鼠嵌閤抗體,為製備抗基孔肯亞病的被動免疫製劑奠定瞭良好的基礎.
목적재CHO세포중표체기공긍아병독인-서감합항체,병대기활성진행분석. 방법이질립pcDNA5/FRT위골가,응용pCI-dhfr1(본실구건병보존)적dhfr기인화hCMV계동자급SV40 polyA,구건료함유공확증기인적포유동물쌍계동자표체재체,RT-PCR극륭구유중화활성서원단극륭항체적경중련가변구기인,여인IgG1경중련항정구기인융합후아극륭도표체재체pA적다극륭위점,구건료표체질립pA-HL, 지질체전염CHO(dhfr-)세포,철도흉선밀정화차황표령병불단제고MTX적농도,사선표체량고적극륭,확대배양、수집상청,병순화,순화적감합항체진행SDS-PAGE、Western 인적、항원결합활성화미량세포중화실험. 결과재MTX적농도위2×10-7mol/L시,획득은정표체세포주,표체량위5mg/L. 결론성공지재CHO(dhfr-)세포표체료구유중화활성적기공긍아병독인-서감합항체,위제비항기공긍아병적피동면역제제전정료량호적기출.
