微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2000年
2期
132-138
,共7页
向华%张亦清%卫文仲%谭华荣
嚮華%張亦清%衛文仲%譚華榮
향화%장역청%위문중%담화영
谷胱甘肽硫转移酶%基因克隆表达%乳酸乳球菌
穀胱甘肽硫轉移酶%基因剋隆錶達%乳痠乳毬菌
곡광감태류전이매%기인극륭표체%유산유구균
用RT-PCR技术从人肝总RNA中分离扩增了人谷胱甘肽硫转移酶A1基因的cDNA序列,克隆至大肠杆菌表达质粒pET23b,采用蛋白表达筛查法及DNA测序证明该cDNA序列完全正确.重组质粒pET23bhgst转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导获得高效表达的可溶性hGSTA1产物,其表达量约为大肠杆菌可溶性总蛋白的40%.将hGSTA1cDNA亚克隆至乳酸乳球菌表达载体pMG36e,电穿孔法转化乳酸乳球菌MG1363获得hGSTA1乳酸乳球菌表达株.SDS-PAGE及Western杂交分析表明该菌株表达预期大小的hGSTA1融合蛋白,经谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析纯化获得的hGSTA1蛋白具有较高的谷胱甘肽硫转移酶活性.具hGSTA1酶活性的乳酸乳球菌工程菌可望应用于研制防癌保健乳制品.
用RT-PCR技術從人肝總RNA中分離擴增瞭人穀胱甘肽硫轉移酶A1基因的cDNA序列,剋隆至大腸桿菌錶達質粒pET23b,採用蛋白錶達篩查法及DNA測序證明該cDNA序列完全正確.重組質粒pET23bhgst轉化大腸桿菌BL21(DE3),經IPTG誘導穫得高效錶達的可溶性hGSTA1產物,其錶達量約為大腸桿菌可溶性總蛋白的40%.將hGSTA1cDNA亞剋隆至乳痠乳毬菌錶達載體pMG36e,電穿孔法轉化乳痠乳毬菌MG1363穫得hGSTA1乳痠乳毬菌錶達株.SDS-PAGE及Western雜交分析錶明該菌株錶達預期大小的hGSTA1融閤蛋白,經穀胱甘肽-瓊脂糖親和層析純化穫得的hGSTA1蛋白具有較高的穀胱甘肽硫轉移酶活性.具hGSTA1酶活性的乳痠乳毬菌工程菌可望應用于研製防癌保健乳製品.
용RT-PCR기술종인간총RNA중분리확증료인곡광감태류전이매A1기인적cDNA서렬,극륭지대장간균표체질립pET23b,채용단백표체사사법급DNA측서증명해cDNA서렬완전정학.중조질립pET23bhgst전화대장간균BL21(DE3),경IPTG유도획득고효표체적가용성hGSTA1산물,기표체량약위대장간균가용성총단백적40%.장hGSTA1cDNA아극륭지유산유구균표체재체pMG36e,전천공법전화유산유구균MG1363획득hGSTA1유산유구균표체주.SDS-PAGE급Western잡교분석표명해균주표체예기대소적hGSTA1융합단백,경곡광감태-경지당친화층석순화획득적hGSTA1단백구유교고적곡광감태류전이매활성.구hGSTA1매활성적유산유구균공정균가망응용우연제방암보건유제품.
