细胞生物学杂志
細胞生物學雜誌
세포생물학잡지
CHINESE JOURNAL OF CELL BIOLOGY
2005年
4期
464-468
,共5页
林蓓%齐藤真木子%岩森正男
林蓓%齊籐真木子%巖森正男
림배%제등진목자%암삼정남
小鼠%α1,2-岩藻糖转移酶%基因%克隆%表达
小鼠%α1,2-巖藻糖轉移酶%基因%剋隆%錶達
소서%α1,2-암조당전이매%기인%극륭%표체
利用RT-PCR方法克隆小鼠3种GDP岩藻糖:β-半乳糖苷α1,2-岩藻糖转移酶(α1,2-fucosyltansferase,α1,2-FT)基因编码区MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ、MFUT-Ⅲ,序列分析结果表明MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ和MFUT-Ⅲ间具有相当的同源性,且分别与人类H基因(78.4%)、Se基因(79.0%)和Sec1基因(74.9%)具有序列同源性.将3种基因编码区分别插入表达载体pcDNA3.1的多克隆位点,并将其分别转染于COS-7细胞,结果显示MFUT-Ⅰ和MFUT-Ⅱ基因转染后的COS-7细胞具有α1,2-FT活性,但在MFUT-Ⅲ基因转染后的COS-7细胞中检测不到这种活性.应用Northern印迹杂交法研究基因在小鼠组织中的表达情况.证实MFUT-Ⅱ可在多种组织中产生3.5kb大小的mRNA转录产物,然而MFUT-Ⅰ和MFUT-Ⅲ分别只在附睾和睾丸中显著表达.Southern印迹杂交分析结果显示:基因MFUT-Ⅱ仅为一个拷贝,而MFUT-Ⅰ和MFUT-Ⅲ可能存在2个拷贝.因此,MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ和MFUT-Ⅲ分别为鼠的H基因、Se基因和Sec1基因.
利用RT-PCR方法剋隆小鼠3種GDP巖藻糖:β-半乳糖苷α1,2-巖藻糖轉移酶(α1,2-fucosyltansferase,α1,2-FT)基因編碼區MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ、MFUT-Ⅲ,序列分析結果錶明MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ和MFUT-Ⅲ間具有相噹的同源性,且分彆與人類H基因(78.4%)、Se基因(79.0%)和Sec1基因(74.9%)具有序列同源性.將3種基因編碼區分彆插入錶達載體pcDNA3.1的多剋隆位點,併將其分彆轉染于COS-7細胞,結果顯示MFUT-Ⅰ和MFUT-Ⅱ基因轉染後的COS-7細胞具有α1,2-FT活性,但在MFUT-Ⅲ基因轉染後的COS-7細胞中檢測不到這種活性.應用Northern印跡雜交法研究基因在小鼠組織中的錶達情況.證實MFUT-Ⅱ可在多種組織中產生3.5kb大小的mRNA轉錄產物,然而MFUT-Ⅰ和MFUT-Ⅲ分彆隻在附睪和睪汍中顯著錶達.Southern印跡雜交分析結果顯示:基因MFUT-Ⅱ僅為一箇拷貝,而MFUT-Ⅰ和MFUT-Ⅲ可能存在2箇拷貝.因此,MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ和MFUT-Ⅲ分彆為鼠的H基因、Se基因和Sec1基因.
이용RT-PCR방법극륭소서3충GDP암조당:β-반유당감α1,2-암조당전이매(α1,2-fucosyltansferase,α1,2-FT)기인편마구MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ、MFUT-Ⅲ,서렬분석결과표명MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ화MFUT-Ⅲ간구유상당적동원성,차분별여인류H기인(78.4%)、Se기인(79.0%)화Sec1기인(74.9%)구유서렬동원성.장3충기인편마구분별삽입표체재체pcDNA3.1적다극륭위점,병장기분별전염우COS-7세포,결과현시MFUT-Ⅰ화MFUT-Ⅱ기인전염후적COS-7세포구유α1,2-FT활성,단재MFUT-Ⅲ기인전염후적COS-7세포중검측불도저충활성.응용Northern인적잡교법연구기인재소서조직중적표체정황.증실MFUT-Ⅱ가재다충조직중산생3.5kb대소적mRNA전록산물,연이MFUT-Ⅰ화MFUT-Ⅲ분별지재부고화고환중현저표체.Southern인적잡교분석결과현시:기인MFUT-Ⅱ부위일개고패,이MFUT-Ⅰ화MFUT-Ⅲ가능존재2개고패.인차,MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ화MFUT-Ⅲ분별위서적H기인、Se기인화Sec1기인.
