军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2005年
6期
531-534,579
,共5页
王全会%左刚%施水兰%赵增强%崔玉芳%毛建平
王全會%左剛%施水蘭%趙增彊%崔玉芳%毛建平
왕전회%좌강%시수란%조증강%최옥방%모건평
mRNA%10-23型脱氧核酶%反义寡核苷酸%基因表达
mRNA%10-23型脫氧覈酶%反義寡覈苷痠%基因錶達
mRNA%10-23형탈양핵매%반의과핵감산%기인표체
目的:10-23型脱氧核酶是脱氧核糖核酸酶中的一种,能主动在RNA分子嘌呤-嘧啶结合点切割所有RNA分子,通过比较反义寡核苷酸的作用,初步研究10-23型脱氧核酶对基因表达抑制作用的发生机制.方法:采用体外转录GFP mRNA与脱氧核酶反应,以及GFP表达质粒与脱氧核酶共转染HeLa细胞,观察脱氧核酶对GFP的抑制作用.结果:体外和胞内实验均显示据靶点设计的10-23型脱氧核酶对绿色荧光蛋白mRNA具有切割作用.当10-23型脱氧核酶的两翼结合臂各具有连续8碱基互补而处在两翼结合臂和酶解核心连接处的2碱基错配时,尽管不能切割mRNA但是在胞内仍然有表达抑制作用;而当两翼结合臂具有4互补碱基紧接1错配碱基和4互补碱基时,10-23型脱氧核酶体外和胞内均丧失作用.结论:10-23型脱氧核酶对基因较强的表达抑制作用来自结合臂的反义寡核苷酸依赖的RNase H降解,和本身对mRNA直接切割作用的叠加,即10-23型脱氧核酶在细胞内具有对基因识别切割和诱导RNase H进行再切割的双重作用.
目的:10-23型脫氧覈酶是脫氧覈糖覈痠酶中的一種,能主動在RNA分子嘌呤-嘧啶結閤點切割所有RNA分子,通過比較反義寡覈苷痠的作用,初步研究10-23型脫氧覈酶對基因錶達抑製作用的髮生機製.方法:採用體外轉錄GFP mRNA與脫氧覈酶反應,以及GFP錶達質粒與脫氧覈酶共轉染HeLa細胞,觀察脫氧覈酶對GFP的抑製作用.結果:體外和胞內實驗均顯示據靶點設計的10-23型脫氧覈酶對綠色熒光蛋白mRNA具有切割作用.噹10-23型脫氧覈酶的兩翼結閤臂各具有連續8堿基互補而處在兩翼結閤臂和酶解覈心連接處的2堿基錯配時,儘管不能切割mRNA但是在胞內仍然有錶達抑製作用;而噹兩翼結閤臂具有4互補堿基緊接1錯配堿基和4互補堿基時,10-23型脫氧覈酶體外和胞內均喪失作用.結論:10-23型脫氧覈酶對基因較彊的錶達抑製作用來自結閤臂的反義寡覈苷痠依賴的RNase H降解,和本身對mRNA直接切割作用的疊加,即10-23型脫氧覈酶在細胞內具有對基因識彆切割和誘導RNase H進行再切割的雙重作用.
목적:10-23형탈양핵매시탈양핵당핵산매중적일충,능주동재RNA분자표령-밀정결합점절할소유RNA분자,통과비교반의과핵감산적작용,초보연구10-23형탈양핵매대기인표체억제작용적발생궤제.방법:채용체외전록GFP mRNA여탈양핵매반응,이급GFP표체질립여탈양핵매공전염HeLa세포,관찰탈양핵매대GFP적억제작용.결과:체외화포내실험균현시거파점설계적10-23형탈양핵매대록색형광단백mRNA구유절할작용.당10-23형탈양핵매적량익결합비각구유련속8감기호보이처재량익결합비화매해핵심련접처적2감기착배시,진관불능절할mRNA단시재포내잉연유표체억제작용;이당량익결합비구유4호보감기긴접1착배감기화4호보감기시,10-23형탈양핵매체외화포내균상실작용.결론:10-23형탈양핵매대기인교강적표체억제작용래자결합비적반의과핵감산의뢰적RNase H강해,화본신대mRNA직접절할작용적첩가,즉10-23형탈양핵매재세포내구유대기인식별절할화유도RNase H진행재절할적쌍중작용.
