CAJ | 학술논문

用野生金荞麦无菌苗的茎和叶片作外植体,茎在MS添加2.0 mg·L-1 6-BA和0.1 mg·L-1NAA的固体培养基上,通过12 d的诱导,可获得100%的诱导率;叶在MS添加1.0 mg·L-6-BA和0.5 mg·L-1 NAA的固体培养基上诱导13 d,可获得100%的诱导率.茎和叶分别在各自激素组合培养基上连续继代3次后,用目视法直接从大量的稳定愈伤组织中筛选获得4种不同次生代谢能力的细胞系:红色系(Stem1愈伤系)、褐色系(Stem2愈伤系)、浅黄色系(Leaf1愈伤系)和白色系(Leaf2愈伤系).用分光光度法直接筛选出高类黄酮含量的红色系,其类黄酮含量为6.3804 mg·g-1,是含量最低的白色系的3.5倍.用改良的CTAB法提取金荞麦高黄酮含量的红色系1～13 d愈伤组织总RNA,用SMART cDNA Library Construction Kit构建cDNA文库.经测定原始文库滴度为1.5×106 pfu·mL-1,扩增总文库滴度为7.0×109 pfu·mL-1,重组率达到98%,插入片段在0.5 kb到2 kb之间,1 kb以上的占66%.通过简并扩增的方式,从总文库中检测到了低峰度表达的R2R3Myb转录调控因子P基因的特异片段.各项指标都表明,已获得较高质量的cDNA文库.金荞麦高类黄酮含量愈伤系的获得及其cDNA文库的构建,不但为野生金荞麦的优异基因资源的保存和其类黄酮次生代谢相关基因的克隆和调控研究打下了的基础,也为最终实现药用次生代谢产物的规模化生产奠定了基础.
용야생금교맥무균묘적경화협편작외식체,경재MS첨가2.0 mg·L-1 6-BA화0.1 mg·L-1NAA적고체배양기상,통과12 d적유도,가획득100%적유도솔;협재MS첨가1.0 mg·L-6-BA화0.5 mg·L-1 NAA적고체배양기상유도13 d,가획득100%적유도솔.경화협분별재각자격소조합배양기상련속계대3차후,용목시법직접종대량적은정유상조직중사선획득4충불동차생대사능력적세포계:홍색계(Stem1유상계)、갈색계(Stem2유상계)、천황색계(Leaf1유상계)화백색계(Leaf2유상계).용분광광도법직접사선출고류황동함량적홍색계,기류황동함량위6.3804 mg·g-1,시함량최저적백색계적3.5배.용개량적CTAB법제취금교맥고황동함량적홍색계1～13 d유상조직총RNA,용SMART cDNA Library Construction Kit구건cDNA문고.경측정원시문고적도위1.5×106 pfu·mL-1,확증총문고적도위7.0×109 pfu·mL-1,중조솔체도98%,삽입편단재0.5 kb도2 kb지간,1 kb이상적점66%.통과간병확증적방식,종총문고중검측도료저봉도표체적R2R3Myb전록조공인자P기인적특이편단.각항지표도표명,이획득교고질량적cDNA문고.금교맥고류황동함량유상계적획득급기cDNA문고적구건,불단위야생금교맥적우이기인자원적보존화기류황동차생대사상관기인적극륭화조공연구타하료적기출,야위최종실현약용차생대사산물적규모화생산전정료기출.