中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2007年
3期
247-250
,共4页
王海丽%鞠爱萍%王长军%潘秀珍%郑峰%陆承平%唐家琪
王海麗%鞠愛萍%王長軍%潘秀珍%鄭峰%陸承平%唐傢琪
왕해려%국애평%왕장군%반수진%정봉%륙승평%당가기
细胞外蛋白因子%原核表达%蛋白纯化
細胞外蛋白因子%原覈錶達%蛋白純化
세포외단백인자%원핵표체%단백순화
目的:克隆、达猪链球菌2型四川人源分离株ZYH24细胞外蛋白因子基因片段,分析蛋白活性.方法:根据GenBank S.suis 2 epf基因序列设计引物,克隆ZYH24株epf 基因片段并进行序列分析;构建原核表达质粒pGEX4T-2-epf,在大肠杆菌中诱导带有谷胱苷肽转移酶(GST)标签的融合蛋白EF-GST的表达;亲和层析法纯化融合蛋白EF-GST,用凝血酶切除重组蛋白中的GST,获得纯化的EF抗原;SDS-PAGE和Western blot分析诱导表达及纯化的重组蛋白.结果:序列分析表明,获得的epf基因片段长895 bp;原核表达的融合蛋白EF-GST分子量约62 000,凝血酶处理后的EF抗原分子量约35 000,两者均可与制备的EF多克隆抗血清发生特异性反应.结论:成功克隆了人源分离株ZYH24 epf基因片段,在原核系统实现高效的功能性表达,为开展EF蛋白的相关研究奠定了基础.
目的:剋隆、達豬鏈毬菌2型四川人源分離株ZYH24細胞外蛋白因子基因片段,分析蛋白活性.方法:根據GenBank S.suis 2 epf基因序列設計引物,剋隆ZYH24株epf 基因片段併進行序列分析;構建原覈錶達質粒pGEX4T-2-epf,在大腸桿菌中誘導帶有穀胱苷肽轉移酶(GST)標籤的融閤蛋白EF-GST的錶達;親和層析法純化融閤蛋白EF-GST,用凝血酶切除重組蛋白中的GST,穫得純化的EF抗原;SDS-PAGE和Western blot分析誘導錶達及純化的重組蛋白.結果:序列分析錶明,穫得的epf基因片段長895 bp;原覈錶達的融閤蛋白EF-GST分子量約62 000,凝血酶處理後的EF抗原分子量約35 000,兩者均可與製備的EF多剋隆抗血清髮生特異性反應.結論:成功剋隆瞭人源分離株ZYH24 epf基因片段,在原覈繫統實現高效的功能性錶達,為開展EF蛋白的相關研究奠定瞭基礎.
목적:극륭、체저련구균2형사천인원분리주ZYH24세포외단백인자기인편단,분석단백활성.방법:근거GenBank S.suis 2 epf기인서렬설계인물,극륭ZYH24주epf 기인편단병진행서렬분석;구건원핵표체질립pGEX4T-2-epf,재대장간균중유도대유곡광감태전이매(GST)표첨적융합단백EF-GST적표체;친화층석법순화융합단백EF-GST,용응혈매절제중조단백중적GST,획득순화적EF항원;SDS-PAGE화Western blot분석유도표체급순화적중조단백.결과:서렬분석표명,획득적epf기인편단장895 bp;원핵표체적융합단백EF-GST분자량약62 000,응혈매처리후적EF항원분자량약35 000,량자균가여제비적EF다극륭항혈청발생특이성반응.결론:성공극륭료인원분리주ZYH24 epf기인편단,재원핵계통실현고효적공능성표체,위개전EF단백적상관연구전정료기출.
