CAJ | 학술논문

目的:应用组织块培养大鼠视网膜干细胞的有效性. 方法:机械分离出生10d大鼠睫状体组织,剪成细小组织块,置入20μg/L 碱性成纤维细胞生长因子、20μg/L表皮生长因子及1×B27添加剂的无血清DMEM/F12培养液中培养,同时取大鼠胚胎脑组织,应用常规机械-酶消化法进行神经干细胞的分离培养作为阳性对照.应用免疫荧光染色检测神经干细胞特异性抗原神经巢蛋白(nestin)的表达,应用含100mL/L的胎牛血清的培养基促进其分化以确定其神经干细胞特性. 结果:原代培养48h后在组织块边缘开始出现细胞团,折光性强,呈球形或者桑葚状悬浮生长.培养4～5d后,悬浮生长的细胞团数量增多,出现较大的细胞团,原代培养7d后传代,传代后细胞能重新形成细胞团.应用免疫荧光方法可检测到细胞内nestin阳性表达,且视网膜干细胞可在以血清为诱导条件下变为贴壁生长,并分化出具有神经细胞形态的细胞.其形态、增殖及可分化特性与作为阳性对照的神经干细胞相似. 结论:组织块培养法对细胞损伤小,操作简便,可成功对大鼠视网膜干细胞进行分离培养.
목적:응용조직괴배양대서시망막간세포적유효성. 방법:궤계분리출생10d대서첩상체조직,전성세소조직괴,치입20μg/L 감성성섬유세포생장인자、20μg/L표피생장인자급1×B27첨가제적무혈청DMEM/F12배양액중배양,동시취대서배태뇌조직,응용상규궤계-매소화법진행신경간세포적분리배양작위양성대조.응용면역형광염색검측신경간세포특이성항원신경소단백(nestin)적표체,응용함100mL/L적태우혈청적배양기촉진기분화이학정기신경간세포특성. 결과:원대배양48h후재조직괴변연개시출현세포단,절광성강,정구형혹자상심상현부생장.배양4～5d후,현부생장적세포단수량증다,출현교대적세포단,원대배양7d후전대,전대후세포능중신형성세포단.응용면역형광방법가검측도세포내nestin양성표체,차시망막간세포가재이혈청위유도조건하변위첩벽생장,병분화출구유신경세포형태적세포.기형태、증식급가분화특성여작위양성대조적신경간세포상사. 결론:조직괴배양법대세포손상소,조작간편,가성공대대서시망막간세포진행분리배양.