蚕业科学
蠶業科學
잠업과학
ACTA SERICOLOGICA SINICA
2010年
5期
759-765
,共7页
王更先%司马杨虎%周嫣娜%季明明%徐世清
王更先%司馬楊虎%週嫣娜%季明明%徐世清
왕경선%사마양호%주언나%계명명%서세청
家蚕%Bm-l(1)基因%丙酮酸脱氢酶%基因克隆%序列分析%基因表达
傢蠶%Bm-l(1)基因%丙酮痠脫氫酶%基因剋隆%序列分析%基因錶達
가잠%Bm-l(1)기인%병동산탈경매%기인극륭%서렬분석%기인표체
丙酮酸脱氢酶(PDH)是丙酮酸脱氢酶复合体(PDC)中的前件酶,参与生成柠檬酸循环(TCA)的起始物乙酰辅酶A,决定生物体内营养成分的分配.利用电子克隆、RT-PCR和cDNA末端快速扩增(RACE)等方法克隆了与果蝇lethal(1)G0334基因类似的具有丙酮酸脱氢酶功能的家蚕Bm-l(1)基因.Bm-l(1)基因的cDNA全长为1 630 bp,由1 200 bp的完整ORF序列、186 bp的5'-UTR和207 bp的3'-UTR组成,含8个外显子和7个内含子,编码蛋白为399个氨基酸残基,分子质量43.93kD,pI 8.07.Bm-l(1)基因编码蛋白的69-365氨基酸残基为E1-dh结构域,该结构域为硫胺素焦磷酸依赖性脱氢酶所特有.蛋白质二级结构预测结果表明α螺旋占28.8%,β折叠占12.0%.采用Clustal W进行多序列比对发现,Bm-l(1)基因编码蛋白与赤拟谷盗等昆虫的PDH具有63%以上的序列相似性,且保守区域高度一致.Bm-l(1)基因mRNA在家蚕整个卵期、幼虫期、蛹期和刚羽化的成虫中,以及5龄3 d幼虫的头部、丝腺、生殖腺、脂肪体、中肠和血液6种组织中都有较高的转录水平,且存在较小的组织差异性.
丙酮痠脫氫酶(PDH)是丙酮痠脫氫酶複閤體(PDC)中的前件酶,參與生成檸檬痠循環(TCA)的起始物乙酰輔酶A,決定生物體內營養成分的分配.利用電子剋隆、RT-PCR和cDNA末耑快速擴增(RACE)等方法剋隆瞭與果蠅lethal(1)G0334基因類似的具有丙酮痠脫氫酶功能的傢蠶Bm-l(1)基因.Bm-l(1)基因的cDNA全長為1 630 bp,由1 200 bp的完整ORF序列、186 bp的5'-UTR和207 bp的3'-UTR組成,含8箇外顯子和7箇內含子,編碼蛋白為399箇氨基痠殘基,分子質量43.93kD,pI 8.07.Bm-l(1)基因編碼蛋白的69-365氨基痠殘基為E1-dh結構域,該結構域為硫胺素焦燐痠依賴性脫氫酶所特有.蛋白質二級結構預測結果錶明α螺鏇佔28.8%,β摺疊佔12.0%.採用Clustal W進行多序列比對髮現,Bm-l(1)基因編碼蛋白與赤擬穀盜等昆蟲的PDH具有63%以上的序列相似性,且保守區域高度一緻.Bm-l(1)基因mRNA在傢蠶整箇卵期、幼蟲期、蛹期和剛羽化的成蟲中,以及5齡3 d幼蟲的頭部、絲腺、生殖腺、脂肪體、中腸和血液6種組織中都有較高的轉錄水平,且存在較小的組織差異性.
병동산탈경매(PDH)시병동산탈경매복합체(PDC)중적전건매,삼여생성저몽산순배(TCA)적기시물을선보매A,결정생물체내영양성분적분배.이용전자극륭、RT-PCR화cDNA말단쾌속확증(RACE)등방법극륭료여과승lethal(1)G0334기인유사적구유병동산탈경매공능적가잠Bm-l(1)기인.Bm-l(1)기인적cDNA전장위1 630 bp,유1 200 bp적완정ORF서렬、186 bp적5'-UTR화207 bp적3'-UTR조성,함8개외현자화7개내함자,편마단백위399개안기산잔기,분자질량43.93kD,pI 8.07.Bm-l(1)기인편마단백적69-365안기산잔기위E1-dh결구역,해결구역위류알소초린산의뢰성탈경매소특유.단백질이급결구예측결과표명α라선점28.8%,β절첩점12.0%.채용Clustal W진행다서렬비대발현,Bm-l(1)기인편마단백여적의곡도등곤충적PDH구유63%이상적서렬상사성,차보수구역고도일치.Bm-l(1)기인mRNA재가잠정개란기、유충기、용기화강우화적성충중,이급5령3 d유충적두부、사선、생식선、지방체、중장화혈액6충조직중도유교고적전록수평,차존재교소적조직차이성.
