Ⅱ型胶原酶体外分离并培养成年小鼠血管纹边缘细胞
Ⅱ형효원매체외분리병배양성년소서혈관문변연세포
Detachment of Adult Mouse Stria Vascularis Marginal Cell with Collagenase Ⅱ and Cells Culture in Vitro
  • 万方数据
    听力学及言语疾病杂志 은역학급언어질병잡지
    JOURNAL OF AUDIOLOGY AND SPEECH PATHOLOGY
    2011年 5期 451-454 ,共4页

    王燕%褚汉启%周良强%陈金%李志勇%刘云%张平%王春芳%黄孝文%崔永华

    왕연%저한계%주량강%진금%리지용%류운%장평%왕춘방%황효문%최영화

    成年小鼠%边缘细胞%酶消化法%细胞培养 成年小鼠%邊緣細胞%酶消化法%細胞培養
    성년소서%변연세포%매소화법%세포배양
    目的 探讨单纯Ⅱ型胶原酶消化法体外分离并培养成年小鼠耳蜗血管纹边缘细胞( marginal cell,MC)的方法.方法 选取6只出生75±3d的健康C57BL/6J小鼠,显微分离其耳蜗血管纹组织,以Ⅱ型胶原酶原代消化培养边缘细胞.倒置显微镜观察细胞形态,噻唑蓝(MTT)法测细胞生长曲线,透射电镜观察细胞的超微结构,免疫荧光法检测上皮细胞标志物——中间丝角蛋白18(CK18)和耳蜗血管纹的独特标志物KCNQ1的表达,RT-PCR法检测CK18和KCNQlmRNA的表达.结果 接种24～48 h后可见细胞贴壁增殖,形成大小不等的细胞岛,一周后细胞迅速生长,相互融合,紧密莲接,形成单层极性上皮层,呈典型的“铺路石”样外观.透射电镜观察可见多角形细胞表面有较多微绒毛,胞浆内线粒体、内质网等细胞器丰富.免疫荧光检测显示CK18和KCNQ1蛋白表达阳性,RT- PCR结果示CK18和KCNQ1mRNA均有表达.结论 采用原代消化培养技术可成功建立成年小鼠耳蜗血管纹MC的体外原代培养,为进一步研究成年期MC的功能和某些内耳疾病的发病机制提供了实验基础.
    목적 탐토단순Ⅱ형효원매소화법체외분리병배양성년소서이와혈관문변연세포( marginal cell,MC)적방법.방법 선취6지출생75±3d적건강C57BL/6J소서,현미분리기이와혈관문조직,이Ⅱ형효원매원대소화배양변연세포.도치현미경관찰세포형태,새서람(MTT)법측세포생장곡선,투사전경관찰세포적초미결구,면역형광법검측상피세포표지물——중간사각단백18(CK18)화이와혈관문적독특표지물KCNQ1적표체,RT-PCR법검측CK18화KCNQlmRNA적표체.결과 접충24～48 h후가견세포첩벽증식,형성대소불등적세포도,일주후세포신속생장,상호융합,긴밀련접,형성단층겁성상피층,정전형적“포로석”양외관.투사전경관찰가견다각형세포표면유교다미융모,포장내선립체、내질망등세포기봉부.면역형광검측현시CK18화KCNQ1단백표체양성,RT- PCR결과시CK18화KCNQ1mRNA균유표체.결론 채용원대소화배양기술가성공건립성년소서이와혈관문MC적체외원대배양,위진일보연구성년기MC적공능화모사내이질병적발병궤제제공료실험기출.
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