酿酒酵母金属硫蛋白的表达、纯化及活性检测
양주효모금속류단백적표체、순화급활성검측
Expression, purification and bioactivity analysis of Saccharomyces cerevisiae metallothionein
  • 万方数据
    兰州大学学报（自然科学版） 란주대학학보（자연과학판）
    JOURNAL OF LANZHOU UNIVERSITY（NATURAL SCIENCES）
    2011年 3期 58-62,67 ,共6页

    梁晓峰%龚映雪%肖文娟%胡佳%郑阳阳%张小洪%王峻梅%刘泽寰

    량효봉%공영설%초문연%호가%정양양%장소홍%왕준매%류택환

    金属硫蛋白%酿酒酵母%原核表达%活性检测 金屬硫蛋白%釀酒酵母%原覈錶達%活性檢測
    금속류단백%양주효모%원핵표체%활성검측
    通过PCR从酿酒酵母基因组DNA上扩增得到酿酒酵母基因CUP1编码的金属硫蛋白序列.将其编码序列克隆到质粒pTWIN1构建重组表达质粒pTWIN1-MT,转化大肠杆菌感受态细胞ER2566.重组融合蛋白CBD-intein1-MT在IPTG的诱导下得到表达,经SDS-PAGE和蛋白质印迹鉴定.用重组菌分别进行铜离子耐受性和吸收等实验,结果表明金属硫蛋白的表达增加了重组菌对铜离子的耐受性和积累量.用chitin亲和层析纯化重组蛋白,并由intein介导融合蛋白的自裂解.SDS-PAGE分析,纯化后的金属硫蛋白的纯度达到95％.纯化后的MT显示出很好的清除羟自由基的能力.
    통과PCR종양주효모기인조DNA상확증득도양주효모기인CUP1편마적금속류단백서렬.장기편마서렬극륭도질립pTWIN1구건중조표체질립pTWIN1-MT,전화대장간균감수태세포ER2566.중조융합단백CBD-intein1-MT재IPTG적유도하득도표체,경SDS-PAGE화단백질인적감정.용중조균분별진행동리자내수성화흡수등실험,결과표명금속류단백적표체증가료중조균대동리자적내수성화적루량.용chitin친화층석순화중조단백,병유intein개도융합단백적자렬해.SDS-PAGE분석,순화후적금속류단백적순도체도95％.순화후적MT현시출흔호적청제간자유기적능력.
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