中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2012年
1期
14-18,23
,共6页
潘爱珍%赵秀芹%张媛媛%王晓萌%柳正卫%万康林
潘愛珍%趙秀芹%張媛媛%王曉萌%柳正衛%萬康林
반애진%조수근%장원원%왕효맹%류정위%만강림
结核分枝杆菌%katG基因%TaqMan-MGB荧光定量PCR
結覈分枝桿菌%katG基因%TaqMan-MGB熒光定量PCR
결핵분지간균%katG기인%TaqMan-MGB형광정량PCR
目的 建立一种特异、灵敏、快速检测结核分枝杆菌katG基因突变的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法.方法根据结核分枝杆菌katG基因315位点突变的特点,设计一对特异性TaqMan-MGB探针和引物,通过反应条件优化,建立荧光定量PCR方法；用克隆到PMD18-T载体上katG基因阳性标准品及不同菌株来评价该方法的特异性、敏感性和重复性.结果 灵敏度高,检测目的基因的最低检测下限10 copies/μL,比常规PCR灵敏高100倍；特异性高,检测16株非结核分枝杆菌标准株和7种常见呼吸道感染细菌的标准株均为阴性；与测序法相比,野生型和突变型探针的敏感性和特异性均为100％.重复性好,批内批间CT值变异系数均小于1％.结论 TaqMan-MGB荧光定量PCR的方法能特异、灵敏、快速检测结核杆菌菌株katG 315位点突变.
目的 建立一種特異、靈敏、快速檢測結覈分枝桿菌katG基因突變的TaqMan-MGB熒光定量PCR方法.方法根據結覈分枝桿菌katG基因315位點突變的特點,設計一對特異性TaqMan-MGB探針和引物,通過反應條件優化,建立熒光定量PCR方法；用剋隆到PMD18-T載體上katG基因暘性標準品及不同菌株來評價該方法的特異性、敏感性和重複性.結果 靈敏度高,檢測目的基因的最低檢測下限10 copies/μL,比常規PCR靈敏高100倍；特異性高,檢測16株非結覈分枝桿菌標準株和7種常見呼吸道感染細菌的標準株均為陰性；與測序法相比,野生型和突變型探針的敏感性和特異性均為100％.重複性好,批內批間CT值變異繫數均小于1％.結論 TaqMan-MGB熒光定量PCR的方法能特異、靈敏、快速檢測結覈桿菌菌株katG 315位點突變.
목적 건립일충특이、령민、쾌속검측결핵분지간균katG기인돌변적TaqMan-MGB형광정량PCR방법.방법근거결핵분지간균katG기인315위점돌변적특점,설계일대특이성TaqMan-MGB탐침화인물,통과반응조건우화,건립형광정량PCR방법；용극륭도PMD18-T재체상katG기인양성표준품급불동균주래평개해방법적특이성、민감성화중복성.결과 령민도고,검측목적기인적최저검측하한10 copies/μL,비상규PCR령민고100배；특이성고,검측16주비결핵분지간균표준주화7충상견호흡도감염세균적표준주균위음성；여측서법상비,야생형화돌변형탐침적민감성화특이성균위100％.중복성호,비내비간CT치변이계수균소우1％.결론 TaqMan-MGB형광정량PCR적방법능특이、령민、쾌속검측결핵간균균주katG 315위점돌변.
