微生物学免疫学进展
微生物學免疫學進展
미생물학면역학진전
PROGRESS IN MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2003年
2期
1-5
,共5页
杨芳%徐维明%刘红岩%龙海亭%肖红剑%李燕
楊芳%徐維明%劉紅巖%龍海亭%肖紅劍%李燕
양방%서유명%류홍암%룡해정%초홍검%리연
TRAIL%基因克隆%原核表达%细胞凋亡
TRAIL%基因剋隆%原覈錶達%細胞凋亡
TRAIL%기인극륭%원핵표체%세포조망
在原核表达系统中表达重组人可溶性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(sTRAIL)分子,纯化表达产物,并进行初步的生物学活性的研究中,通过提取外周血淋巴细胞总RNA进行RT-PCR克隆sTRAIL cDNA,构建sTRAIL的原核表达载体,用限制性酶切和DNA测序进行鉴定,IPTG诱导表达.以发酵罐放大培养,SDS-PAGE和Western-blot确认表达,用亲和层析和阳离子层析纯化表达产物,使用L929、Qay肝癌、K562人白血病等肿瘤细胞鉴定活性.结果发现重组表达的sTRAIL融合蛋白占总蛋白的39%,单纯蛋白纯化后纯度达95%,用抗人TRAIL多抗可以确认表达了TRAIL分子,能诱导几株肿瘤细胞凋亡.原核表达系统正确表达了TRAIL分子,并摸索了中试生产的条件,为其在肿瘤生物治疗中的应用奠定了基础.
在原覈錶達繫統中錶達重組人可溶性腫瘤壞死因子相關的凋亡誘導配體(sTRAIL)分子,純化錶達產物,併進行初步的生物學活性的研究中,通過提取外週血淋巴細胞總RNA進行RT-PCR剋隆sTRAIL cDNA,構建sTRAIL的原覈錶達載體,用限製性酶切和DNA測序進行鑒定,IPTG誘導錶達.以髮酵罐放大培養,SDS-PAGE和Western-blot確認錶達,用親和層析和暘離子層析純化錶達產物,使用L929、Qay肝癌、K562人白血病等腫瘤細胞鑒定活性.結果髮現重組錶達的sTRAIL融閤蛋白佔總蛋白的39%,單純蛋白純化後純度達95%,用抗人TRAIL多抗可以確認錶達瞭TRAIL分子,能誘導幾株腫瘤細胞凋亡.原覈錶達繫統正確錶達瞭TRAIL分子,併摸索瞭中試生產的條件,為其在腫瘤生物治療中的應用奠定瞭基礎.
재원핵표체계통중표체중조인가용성종류배사인자상관적조망유도배체(sTRAIL)분자,순화표체산물,병진행초보적생물학활성적연구중,통과제취외주혈림파세포총RNA진행RT-PCR극륭sTRAIL cDNA,구건sTRAIL적원핵표체재체,용한제성매절화DNA측서진행감정,IPTG유도표체.이발효관방대배양,SDS-PAGE화Western-blot학인표체,용친화층석화양리자층석순화표체산물,사용L929、Qay간암、K562인백혈병등종류세포감정활성.결과발현중조표체적sTRAIL융합단백점총단백적39%,단순단백순화후순도체95%,용항인TRAIL다항가이학인표체료TRAIL분자,능유도궤주종류세포조망.원핵표체계통정학표체료TRAIL분자,병모색료중시생산적조건,위기재종류생물치료중적응용전정료기출.
