中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE
2003年
3期
289-293
,共5页
张晓东%苟大为%缪时英%张建超%宗书东%王琳芳
張曉東%茍大為%繆時英%張建超%宗書東%王琳芳
장효동%구대위%무시영%장건초%종서동%왕림방
精子发生 基因克隆 RSD-7cDNA Sertoli细胞
精子髮生 基因剋隆 RSD-7cDNA Sertoli細胞
정자발생 기인극륭 RSD-7cDNA Sertoli세포
目的分离、克隆精子发生相关基因,深入了解精子发生的分子机制.方法采用本组克隆的大鼠睾丸EST筛选cDNA文库、Northern blot、原核表达和纯化、抗体制备和免疫组化等技术.结果(1)获得1个新的全长cDNA序列,命名为RSD-7.全长1 238 bp,编码232个氨基酸,GenBank接收号为AF315467.序列分析显示,RSD-7基因编码蛋白质含有1个Ubiquitin-1ike结构域.(2)Northern blot结果显示,在8种成鼠组织中,RSD-7基因仅在睾丸组织中有明显表达.不同发育天龄的大鼠睾丸组织Northern blot结果显示,出生后30 d的大鼠RSD-7基因开始表达,一直到120 d仍有表达.(3)RSD-7 cDNA在大肠杆菌中获得高效表达,并纯化了GST-RSD-7融合蛋白,以此为抗原制备了高效价的抗RSD-7蛋白的多克隆抗体.(4)通过免疫组织化学方法,RSD-7蛋白定位于Sertoli细胞胞浆和质膜上.结论初步分析了RSD-7基因的表达特征并制备了抗RSD-7多克隆抗体,为进一步研究RSD-7蛋白在精子发生过程中的功能提供了条件.
目的分離、剋隆精子髮生相關基因,深入瞭解精子髮生的分子機製.方法採用本組剋隆的大鼠睪汍EST篩選cDNA文庫、Northern blot、原覈錶達和純化、抗體製備和免疫組化等技術.結果(1)穫得1箇新的全長cDNA序列,命名為RSD-7.全長1 238 bp,編碼232箇氨基痠,GenBank接收號為AF315467.序列分析顯示,RSD-7基因編碼蛋白質含有1箇Ubiquitin-1ike結構域.(2)Northern blot結果顯示,在8種成鼠組織中,RSD-7基因僅在睪汍組織中有明顯錶達.不同髮育天齡的大鼠睪汍組織Northern blot結果顯示,齣生後30 d的大鼠RSD-7基因開始錶達,一直到120 d仍有錶達.(3)RSD-7 cDNA在大腸桿菌中穫得高效錶達,併純化瞭GST-RSD-7融閤蛋白,以此為抗原製備瞭高效價的抗RSD-7蛋白的多剋隆抗體.(4)通過免疫組織化學方法,RSD-7蛋白定位于Sertoli細胞胞漿和質膜上.結論初步分析瞭RSD-7基因的錶達特徵併製備瞭抗RSD-7多剋隆抗體,為進一步研究RSD-7蛋白在精子髮生過程中的功能提供瞭條件.
목적분리、극륭정자발생상관기인,심입료해정자발생적분자궤제.방법채용본조극륭적대서고환EST사선cDNA문고、Northern blot、원핵표체화순화、항체제비화면역조화등기술.결과(1)획득1개신적전장cDNA서렬,명명위RSD-7.전장1 238 bp,편마232개안기산,GenBank접수호위AF315467.서렬분석현시,RSD-7기인편마단백질함유1개Ubiquitin-1ike결구역.(2)Northern blot결과현시,재8충성서조직중,RSD-7기인부재고환조직중유명현표체.불동발육천령적대서고환조직Northern blot결과현시,출생후30 d적대서RSD-7기인개시표체,일직도120 d잉유표체.(3)RSD-7 cDNA재대장간균중획득고효표체,병순화료GST-RSD-7융합단백,이차위항원제비료고효개적항RSD-7단백적다극륭항체.(4)통과면역조직화학방법,RSD-7단백정위우Sertoli세포포장화질막상.결론초보분석료RSD-7기인적표체특정병제비료항RSD-7다극륭항체,위진일보연구RSD-7단백재정자발생과정중적공능제공료조건.
